小四五颗粒对糖尿病肾病大鼠血浆蛋白质图谱的影响

魏 敏，孙晓敏，罗 仁，柳志伟，郑雪花

(1福建中医药大学中西医结合学院，福州350122;2南方医科大学中医药学院)

糖尿病肾病(DN)是糖尿病最严重的并发症之一，是导致终末期肾病(ESRD)的主要病因［1］。临床上应用中药小四五颗粒治疗DN已取得良好疗效。2013年4～12月，我们对DN大鼠模型给予小四五颗粒，观察其血浆蛋白质图谱的变化差异，旨在从蛋白质分子水平阐明DN的发病机制及小四五颗粒治疗DN的作用机理。

1 材料与方法

1.1 材料 选用SPF级Wistar雄性大鼠24只，体质量200～280 g，鼠龄3个月左右，由南方医科大学动物实验中心供应。小四五颗粒剂(柴胡、黄芩、半夏、人参、白术、茯苓、泽泻、猪苓、桂枝、熟地黄、白芍、当归、川芎、甘草等)由南方医科大学中医药学院制剂室制成颗粒剂，临用前配成混悬液。硫代硫酸钠、无水碳酸钠、甲醛、硝酸银、乙醇、冰醋酸、醋酸钠、甘氨酸均为天津大茂化学试剂厂试剂，药物STA、血浆去高丰度蛋白试剂盒购自Sigma公司，等电聚焦仪、垂直电泳仪及其配件均为Bio-Rad公司配套仪器，图像分析软件为 Image Master 2D platinum 5.0。

1.2 方法

1.2.1 动物分组与模型制作 大鼠适应性喂养1周后，禁食12 h，随机分为模型组、治疗组、正常对照组各8只。模型组和治疗组腹腔注射65 mg/kg STZ，72 h后尾静脉取血测血糖，以血糖＞16.7 mmol/L为糖尿病模型成功，2周后测微量白蛋白、血糖，高于正常值者为DN造模成功。造模成功后，治疗组给予小四五颗粒1.8 g/kg(按照人与大鼠体表面积换算，相当于成人20 g/d)灌胃，模型组与正常对照组给予等体积生理盐水灌胃，均1次/d，连续4周。

1.2.2 蛋白定量检测 处死大鼠，腹主动脉取血，4℃离心10 min，取上层血浆，EP管 100 μL/管分装后，－80℃保存备用。……