厄洛替尼对胰腺癌细胞侵袭力的影响及机制

于锦萍，石国刚，张秀艳，王 林，陈 红，房 芳

(1唐山市工人医院分院，河北唐山063000;2遵化市人民医院;3河北联合大学附属医院;4唐山市工人医院)

胰腺癌术后转移是胰腺癌手术切除治疗的难点。研究显示，胰腺癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)的阳性率接近50%，其参与了胰腺癌的发生、发展和转移［1］。2003～2008年，我们观察了厄洛替尼对胰腺癌细胞生长、侵袭的影响及其相关因子核转录因子NF-κB的表达变化。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 人胰腺癌细胞株PANC-1购自中国科学院上海细胞生物学研究所。MTT购于美国Sigma aldrich公司，RAD001用二甲基亚砜(DMSO)配制成1 mmol/L贮备液，实验时用RPMI1640培养液稀释至所需浓度。

1.2 方法

1.2.1 MTT比色法检测细胞增殖情况 调节PANC-1细胞浓度，以3×103/孔接种于96孔培养板中，根据厄洛替尼的药物浓度分为0、5、25、50 μmol/L四个浓度组，每组设6个复孔，每孔加入5 mg/mL MTT溶液20 mL，37℃孵育4 h，轻轻吸弃培养液，每孔加入150 mL DMSO，振荡10 min，选择490 nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光密度(OD)值，计算各组细胞生长抑制率，抑制率=［(空白对照组OD值－各实验组OD值)/空白对照组OD值］×100%。

1.2.2 Transwell检测细胞侵袭力 实验分为空白对照组、EGF(表皮生长因子)组、厄洛替尼组、EGF联合厄洛替尼组。EGF、厄洛替尼作用浓度分别为10 ng/mL、4 μmol/L，联合组为 EGF 先作用 24 h 后再加厄洛替尼作用4 h。分别收集各处理组的PANC-1细胞培养上清液，置于8 μm孔径的 Transwell板中，于半透膜上层加入2×105PANC-1细胞系。4 h后于显微镜下计数每个高倍视野平均细胞数。

1.2.3 Western blot检测 NF-κB 蛋白表达 收集各组细胞，加裂解液冰上裂解，12 000 r/min离心10 min，取上清测定浓度后 －80℃保存备用。SDS-PAGE电泳分离，完毕后将蛋白转移到PVDF膜上。……