ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β1介导的A549细胞上皮—间质转化的抑制作用

李 岩，吴爱萍，周海英，吕 铮，高 杨，任淑华

(1唐山市工人医院，河北唐山063000;2河北联合大学基础医学院)

肺癌是常见的恶性肿瘤，其发病率及病死率很高，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占全部肺癌的70%～80%，且70%以上的患者确诊时已失去手术机会，即使采用放、化疗等综合治疗仍不能提高其生存率。最近研究表明，上皮—间质转化(EMT)可能在肿瘤的发生、发展(尤其是侵袭和转移)中发挥重要的调控作用，其可能是肿瘤侵袭和转移的始动因素，且与肿瘤干细胞、肿瘤放化疗抵抗和耐药密切相关［1］。Ras同源物GTP酶(Rho)信号与肿瘤的侵袭和转移关系密切，现已证实，其下游特征性效应器Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)参与细胞的收缩、迁移、增殖和凋亡等过程［2，3］。2012年，我们观察了ROCK阻断剂Y-27632对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的NSCLC A549细胞EMT的调节作用，旨在探讨Y-27632对TGF-β1介导的A549细胞EMT的抑制作用，为开发新的肿瘤抑制药物Y-27632提供一定的理论基础和实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 NSCLC A549细胞购自中科院上海细胞库，Y-27632购自Cayman chemica公司，TGF-β1购自Peprotech公司;E-钙黏蛋白一抗、波形蛋白一抗、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)一抗、ROCK-I一抗购自Epitomics公司;血清应答因子(SRF)一抗、心肌相关转录因子-A(MATF-A)一抗购自Santa cruz公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞诱导与分组 A549细胞常规培养并传代，待细胞密度为60%左右时进行实验。实验分为3组，对照组在含0.2%FBS的DMEM培养条件下进行实验;TGF-β1组在含0.2%FBS的DMEM培养条件下，加入5 ng/mL的TGF-β1诱导;Y-27632组在含0.2%FBS的DMEM培养条件下，先给予Y-27632 10 μmol预孵育1 h，再加入5 ng/mL的TGF-β1诱导［4］。在倒置显微镜下进行细胞形态观察并拍照。

1.2.2 划痕实验检测细胞迁移 将细胞按2× 104/孔种植于24孔板，待次融合状态后，用200μL枪头在其孔中央轻轻划痕，每组8孔，48 h后在倒置显微镜下进行细胞形态观察并拍照。……