小鼠肝大部切除术的改进

张 诚, 姚菊芳

(上海交通大学医学院附属仁济医院1.普外科; 2. 动物实验室, 上海 200127)

·经验交流·

小鼠肝大部切除术的改进

张 诚1, 姚菊芳2

(上海交通大学医学院附属仁济医院1.普外科; 2. 动物实验室, 上海 200127)

目的 改进小鼠肝大部切除模型的技术。方法 在小鼠部分肝切除之前，预先结扎小鼠肝脏左叶及中叶的Glisson系统，然后建立模型，比较术后结果。结果 经改进后的小鼠肝切除模型发生出血及胆漏等并发症的风险明显降低，提高了术后生存率。结论 预先结扎Glisson系统技术是一种更加理想的小鼠大部肝切除方法。

小鼠; 肝大部切除术

啮齿类动物的肝大部切除是肝病实验研究中十分常用的一种动物模型[1～3]。1931年，Higgins和Anderson等人创制了该模型[4]，这种模型直接结扎大鼠肝脏的上三叶肝蒂并随之切除(70%肝组织)，术式简单，对术者的外科技术尤其是显微外科技术要求不高，因而得到广泛应用。但是与大鼠相比，小鼠肝叶尤其是肝叶血管胆管组织纤小且结构有差别，直接应用该术式有一定的并发症发生率，主要包括出血、胆瘘等，从而干扰实验结果[5～6]。

曾有作者通过分两次分别结扎切除小鼠左外叶和中叶的方法改进该模型[7～8], 作者在以往的实验研究中曾使用该方法, 发现其依然存在一定的并发症率和死亡率。因此, 作者试图通过先整体结扎待切除肝叶的Glisson系统(包含门静脉、肝动脉和胆管)再进行分叶切除的方法进一步优化该模型, 实践证明作者的改进方法显著降低了动物的并发症率和死亡率。

1 材料与方法

1.1 实验动物及肝脏解剖结构

清洁级雄性C57 BL/6小鼠208只, 8～12周龄，20～25 g，购自上海斯莱克实验动物责任有限公司[SCXK(沪) 2012-0002]，饲养于上海交通大学医学院附属仁济医院实验动物中心[SYXK(沪)2011-0121]。饲养室温20～24℃，自由饮食。小鼠正常肝脏解剖示意图见图1。

1.2 实验器材及试剂

显微手术器械(上海医疗器械厂)，手术显微镜(上海医疗器械股份有限公司医用光学仪器厂), 7-0 SurgiPro聚乙烯线(美国泰科医疗)，4-0爱惜康丝线(强生医疗器材有限公司)，恒温电热毯(上海奥尔科特生物科技有限公司)，戊巴比妥(美国Sigma)，乳酸林格氏液(上海百特医疗用品有限公司)。

1.3 麻醉及手术步骤

1.3.1 麻醉及围手术期处理 以戊巴比妥钠60 mg/kg腹腔注射诱导及维持麻醉。麻醉成功后小鼠平卧固定于带有保温及体温监测装置的手术台上。在肝叶切除后, 腹腔内以0.3 m l林格氏液(已预热至39℃)冲洗。为补足手术过程中丢失的体液, 术后皮下注射0.5 m l林格氏液, 并且置于恒温环境下直至麻醉苏醒。

图1 小鼠正常肝脏解剖示意图

1.3.2 传统70%肝大部切除方法 手术步骤与文献报道的方法基本一致[7～11]。主要步骤包括: 肋缘下横切口进腹充分暴露肝脏。锐性分离肝周韧带，游离各肝叶。轻提起肝左外叶，以4-0丝线结扎此叶肝蒂根部并切除(图2A)，同样的方法以4-0丝线结扎肝中叶并将其切除(图2 B、C)。

1.3.3 改进的肝大部切除术 同样于小鼠肋缘下横切口进腹充分暴露肝脏。锐性分离肝周韧带，游离各肝叶。在结扎小鼠肝脏左外叶及中叶之前，以7-0 SurgiPro聚乙烯线缝扎阻断肝左叶及肝中叶的Glisson系统(图2D)，阻断入肝血流及胆管，此时可以观察到小鼠肝左外叶及肝中叶颜色明显变浅。之后步骤与传统方法相同，逐步切除小鼠肝脏左外叶及中叶(图2A～C)。

1.4 统计学分析

运用SPSS11.0，卡方检验进行比较。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

按传统方法，对78只小鼠实行肝切除。另有130只小鼠接受了改进的肝切除方法。术后并发症发生率及生存率如表1。

图2 传统及改进的小鼠肝大部切除术

表1 两种术式的术后小鼠并发症率及生存率

3 讨论

按传统方法进行的小鼠肝切术中，出血是较常见的并发症。出血常发生在切除后的肝叶残端，大多数情况下，可以通过填塞明胶海绵等止血材料有效控制出血。作者按传统方法实施手术，有2只小鼠在术后7 d内死于出血。同时观察到有5只小鼠发生胆瘘，其中有3只死亡。另外还有2只的死亡原因不明。

作者对传统方法改进实施手术，并发症率大大降低，仅有1只小鼠死于术后无法控制的出血(手术过程中，缝扎肝叶Glisson系统时损伤门静脉)，另一只死于在打开腹膜时肠道的损伤，这些主要都是由于操作者手法不熟练，而非该术式本身的缺陷所致。整个小鼠肝切除过程时间控制在15～20 min,与传统的肝切术式相比手术时间没有延长。

传统方法实施的小鼠肝大部切除主要存在的并发症是出血和胆管并发症。由于小鼠Glisson系统与肝静脉之间存在一定的距离，用丝线结扎肝叶时不可避免会切割小鼠的肝实质及脉管结构，造成肝动脉及胆管损伤，从而导致出血及胆瘘，影响动物的术后生存，造成实验结果的偏差。作者的术式改进主要是在结扎小鼠肝叶前，先阻断所切肝叶的Glisson系统。值得注意的是，小鼠的门静脉位于肝中叶下方，如果先整块结扎肝叶，会牵拉到腔静脉，从而造成腔静脉狭窄，进而导致残余肝叶坏死。为了解决这个问题，作者就在结扎肝叶前，于肝中叶侧面做了一个小切口，然后切除肝叶。由于结扎了肝叶的Glisson系统，阻断了肝叶血流，有效地减少了肝切后出血的发生。

除了减少了手术并发症的发生及提高了生存率，作者的方法还有以下优点。第一，结扎肝叶前阻断G lisson系统，使切除肝叶中血液量减少，这样切除肝叶后可以减少失血量，从而有助于小鼠围手术期恢复。由于切下的肝脏标本不含血液，减少了对肝组织检测实验结果的干扰。第二，由于先缝扎了切除肝叶的Glisson系统，可以以此结扎线为标志，在此平面上结扎肝叶，从而减少腔静脉狭窄及残余肝叶充血的发生。

总之，小鼠肝大部切除模型是肝脏生理及病理生理研究中十分常用的动物模型[11]。既往的术式有一定的并发症率。作者的手术改进在于小鼠肝叶整块结扎前先结扎肝叶的Glisson系统，该步骤易于实施，十分安全，并且无需显微器械的辅助。这个简单的改进只在原来术式的基础上多花费20 s左右，实践证明能显著减少手术并发症的发生，进一步提高术后生存率，更为重要的是有助于得到稳定可靠的实验结果。

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Q95-33

A

1674-5817(2014)01-0050-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.010

2013-07-17

张 诚(1983-), 男, 硕士, 医师, 主要从事外科学基础与临床研究, E-mail: 18930518352@163.com

姚菊芳, E-mail: yaoshirley@163.com