肾小球疾病患者尿液比较蛋白质组学研究方法的建立

王　玉　孙　伟　左　科　王　霞　郑春霞　高友鹤　刘志红

尿液一直是寻找肾脏病无创性标志物的良好来源。但是，在疾病状态下，肾小球滤过屏障及相关肾单位结构受损，大量血浆中的高丰度蛋白进入尿液，其所形成的高丰度抑制使得尿液蛋白质组学对这类患者的探索面临不少困难。

多种蛋白质组学技术已经应用于这类疾病尿液蛋白的研究，例如二维电泳-质谱(2DE-MS),表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-MS)，和毛细管电泳-质谱(CE-MS)[1-3]。同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记的液质联用的蛋白质组学研究方法是一种新的定量蛋白质组学研究策略，它具有定量较准确，全面分析中低丰度蛋白等优点。目前已广泛应用于血液、组织、正常尿蛋白质组学[4-6]，但还未应用于肾小球疾病患者尿液的报道。

膜性肾病(MN)和局灶节段性肾小球硬化(FSGS)是临床上导致肾病综合征最常见的两种病理类型。目前对上述疾病的诊断依赖于肾活检组织病理学检查，尚缺乏用于诊断、鉴别诊断、判断病情及指导治疗的无创性标志物。本研究中，我们建立了联合白蛋白/IgG抗体清除和ITRAQ标记的二维液相色谱与串联质谱联用技术(2D-LC MS/MS)用的尿液蛋白质组学检测方法，并对临床表现肾病综合征的MN和FSGS患者的尿液蛋白质组学进行比较分析。

对象和方法

研究材料本研究得到南京军区南京总医院伦理委员会批准。尿液样本来源于2012年南京军区南京总医院肾脏科住院和门诊患者，标本采集经患者本人或家属知情同意。……