利用荧光激活细胞分选技术获取荧光蛋白标记肾小球足细胞

付　佳　何慈江　刘志红

足细胞是肾小球中具有重要功能的一类细胞，足细胞损伤参与多种肾脏疾病的发生发展过程。阐明足细胞损伤及修复机制是当今肾脏病研究的一个重要领域。然而，目前足细胞研究大多采用体外培养的足细胞系，由于体外细胞培养的环境可改变细胞生物学特性，因而并不能客观的反应其在体内的实际状态，限制了对足细胞的研究[1]。由此，近年来更多的研究致力于寻找从动物体内提取足细胞的方法。为弥补现有的技术因不能获得满足基因组学研究水平的产量和纯度而未得到广泛应用的不足[2,3]，基于流式细胞仪的荧光激活细胞分选(FACS)技术应运而生。

流式细胞仪是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的高效检测仪器，提供生物粒子大小、结构及荧光强度等信息。其应用范围非常广泛，其中细胞分选技术就是它的重要应用之一。细胞分选技术可根据细胞的特性将其从混合样品中分离出来，目前常用的分选技术包括单细胞分选(IsoRaft Array，DEP Array)、密度梯度离心法、免疫磁珠法及流式分选法(FACS)。与传统分选方法相比，流式分选法具有极高的精确度和速度，可同时进行阴性和阳性选择，甚至多路分选，且不受限于表面抗原，可根据任何能检测到的发光度(如细胞体积)或荧光(DNA、RNA或蛋白含量，酶活性，特异抗原)散射度差异来分离细胞[4]。流式细胞仪通过极细的鞘液包裹推动单细胞/微粒排成……