bar基因表达蛋白单克隆抗体制备及ELISA 检测方法的建立

龙丽坤 李葱葱 张明 李飞武

（吉林省农业科学院，长春 130033）

bar基因表达蛋白单克隆抗体制备及ELISA 检测方法的建立

龙丽坤 李葱葱 张明 李飞武

（吉林省农业科学院，长春 130033）

通过原核表达诱导bar基因表达蛋白，通过表达蛋白免疫BALB/c 小鼠，经细胞融合、筛选克隆，获得一个杂交瘤细胞株。以兔多抗作为捕获抗体，鼠单抗作为示踪抗体，辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG 作为检测系统，建立了转基因植物bar基因检测双抗夹心ELISA 方法，试验证明利用该抗体建立的ELISA检测方法含有转bar基因的转基因玉米成分具较好的特异性和灵敏度。为转基因成分的检测提供了安全、快速、准确的技术手段。

bar基因 杂交瘤细胞 单克隆抗体 转基因检测

随着转基因技术的不断发展，人们对于转基因生物及其产品的安全性的关注度越来越高，为此，包括我国在内的50多个国家和地区建立了标识制度，对转基因产品实行严格监管。标识监管制度的实施，依赖于快速、灵敏、准确的检测方法。目前转基因产品检测技术主要分为两大类，一类以外源DNA为检测对象，如PCR、LAMP等；另一类以外源基因表达蛋白质为检测对象，如ELISA、快速检测试纸条等［1］。

转基因外源蛋白检测方法是以纯度好、效价高的蛋白抗体与抗原蛋白的特异性结合为基础。目前转基因品种中外源蛋白抗体的制备和方法应用，针对Cry1Ab、Cry1Ac等Bt蛋白，CP4-EPSPS蛋白，磷酸酶II等蛋白的检测方法已广泛应用［2］。bar基因，编码蛋白—膦丝菌素乙酰转移酶（PAT），该基因广泛应用于基因工程育种中，也是遗传转化中的标记基因，它使植物抵抗以L-phosphiothricin（PPT）为活性成分的除草剂［3］。……