人LL-37与干扰素α2a密码子的优化及其在毕赤酵母中的融合表达

张明杰

（广东紫金正天药业有限公司，河源 517000）

人LL-37与干扰素α2a密码子的优化及其在毕赤酵母中的融合表达

张明杰

（广东紫金正天药业有限公司，河源 517000）

通过密码子优化，在毕赤酵母中高效表达人LL-37与IFN-α2a融合蛋白。先按P. pastoris密码子偏好性对LL-37与IFN-α2a的原始密码子进行了改造，并在二者之间加上GlyGlyGlyGlySer的柔性连接接头，人工合成设计的新序列，最后通过pPIC9K载体将其整合入P. pastoris GS115的基因组，构建出重组菌株GS115LI。利用遗传霉素浓度梯度筛选出两株高拷贝的GS115LI1和GS115LI2菌株。对这两株菌经发酵诱导后的发酵液进行SDS-PAGE检测、抗病毒活性检测和抗菌活性检测，证明重组株既能够成功表达出LL-37与IFN-α2a的融合蛋白，而且该融合蛋白成功保留了抗菌肽与干扰素的功能活性。诱导发酵后，融合蛋白的产量可达到819.1 mg/L，经盐析、疏水层析和离子交换层析分离，可得到纯度达97%的融合蛋白产物，回收率可达到46.2%，纯化后产品的效价可达2.6×108IU/mg。经过密码子优化后，成功实现在毕赤酵母中高效表达出既有LL-37抗菌活性又具有干扰素α2a活性的融合蛋白。

干扰素α2a LL-37 融合 表达

干扰素发现于1957年，后续的研究证实其具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等生理功能，可由人或动物的机体在受到病毒的侵扰下诱导产生，同时某些细菌和化合物也能刺激机体的细胞合成干扰素［1］。

按合成干扰素的细胞差异，通常将干扰素区分为α、β、γ三型，其中α主要由白细胞合成，β型主要由成纤维细胞合成，γ型主要由T细胞合成。每一型又根据氨基酸组成上的差异进一步分为亚型，α的