PAK1在胃癌组织中的表达及其临床意义的探讨

高云升

（辽宁省盖州市中心医院普通外科，辽宁 盖州 115200）

PAK1在胃癌组织中的表达及其临床意义的探讨

高云升

（辽宁省盖州市中心医院普通外科，辽宁 盖州 115200）

目的 对p21活化激酶1(p21-activated kinase 1，PAK1)在胃癌组织中的表达及其临床意义探讨。方法 选择临床病理资料齐全的胃癌蜡块标本75例，正常胃黏膜标本12例作对照。采用SP免疫组化方法检测PAK1的表达。结果 PAK1在胃癌组织中高表达，并随分级的降低、淋巴转移的产生、远隔转移的发生、临床分期的提高而明显增高（P均＜0.05）。结论 PAK1对胃癌的发生、发展、侵袭和转移起重要的促进作用。

胃癌；PAK1；MMP-9

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择盖州中心医院临床及病理资料齐全2008年至2010年手术切除并经病理证实为胃癌的蜡块标本75例，全部病例术前均未进行过化疗或放疗，病理均为腺癌。其中男50例，女25例；年龄38～75岁，平均55.6岁；肿瘤的原发灶大小、深度（T）、淋巴结转移（N）由病理科确定，远处转移（M）由病理学和临床确定。组织学分型：高分化17例，中分化28例，低分化30例；局部淋巴转移：无转移34例，有转移41例。根据1997年国际抗癌联盟（UICC）制定的TNM分期标准进行临床分期，Ⅰ期10例，Ⅱ期29例，Ⅲ期17例，Ⅳ期19例。另取正常胃黏膜组12例为对照。

1.2 主要试剂

兔抗人PAK1单克隆抗体购自美国Abcam公司，鼠抗人MMP-9(GE-213)单隆抗体购自NeoMarker公司。S-P试剂盒及DAB显色试剂盒购自福州市迈新生物技术开发公司。免疫组织化学染色所需的常规试剂。

1.3 方法

常规HE染色，确定标本的组织分化程度。检测PAK1在胃癌组织中的表达采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接(S-P)免疫组织化学方法。对照：用已知阳性的乳腺癌切片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。结果判定：PAK1主要表达于间质的内皮细胞及淋巴细胞的细胞膜，为浅黄、棕黄、棕褐色。先于低倍镜下观察，排除肿瘤坏死出血区及边缘反应区，于染色相对密集区选取5个视野，于高倍镜下进行观察，对PAK1进行半定量测定。

1.4 统计学处理

应用SPSS13软件进行统计学处理，各项指标间差别检验均应用χ2检验，组间相关性采用Spearmann相关分析，P＜0.05有统计学意义。

2 结 果

PAK1的实验结果：PAK1的阳性表达率与胃癌的淋巴转移、肿瘤浸润深度、临床分期呈正相关（P＜0.05），PAK1的阳性表达率随肿瘤淋巴转移的产生、临床分期的提高、肿瘤浸润深度的加深而增高；与肿瘤的病理分化程度呈负相关（P＜0.05），PAK1的阳性表达率随着肿瘤病理分化程度的增高而降低，PAK1在胃癌组织中的阳性表达率与患者的性别、年龄、肿瘤大小无相关性（P＞0.05）见表1。

表1 胃癌中PAK1的表达与病理因素的关系

3 讨 论

P21活化激酶1(p21-activated kinase 1，PAK1)为一类进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，人类的PAK1基因定位于染色体20q12-q13[1]，PAK1在许多组织中广泛表达，作为小G蛋白Rho家族Cdc42和Rac1的下游靶蛋白，可以被生长因子及其他胞外信号通过GTP酶依赖的信号通路或非GTP酶依赖的信号通路活化。PAK1通过磷酸化下游因子可以保护癌细胞免于凋亡，促进癌症表型。PAK1磷酸化Bad的Ser112和Ser136位点，显著降低Bad与Bcl-2或Bcl-x(L)的相互作用，并增加Bad与14-3-3蛋白的相互作用，抑制凋亡。研究发现通过PAK1的N末端自抑制域的过量表达抑制PAK1活性，可以增加细胞的凋亡[2]。另外PAK1也可磷酸化DLC1-BimL二聚体，降低BimL与Bcl-2的相互作用，抑制细胞凋亡，促进癌细胞表型[3]。HGF/SF可以通过活化Akt/PAK1信号通路，激活转录因子NF-κB，使人前列腺癌细胞免于凋亡[4]。非受体酪氨酸激酶Etk通过下游互作蛋白PAK1控制着乳腺肿瘤细胞的非锚定依赖性和恶性增生。PAK1介导的磷酸化merlin使一种肿瘤抑制基因NF2失活，可以导致肿瘤的扩散和侵袭。肿瘤细胞中，PAK1信号调节的异常会影响DNA多倍体的生成，导致细胞非锚定依赖性生长和染色体异常。PAK1通过ERα，上调cyclin D1的表达，与乳腺癌的进程相关[5]。在人乳腺癌细胞中，侵袭表型发生、发展及PAK1的活化与生长因子的刺激有关。Heregulin(HRG)与人EGF受体Ⅱ/人EGF受体Ⅲ(HER2/HER3)结合后迅速激活PAK1，促进了PAK1和肌动蛋白的结合，引起细胞移动。用抗HER2单克隆抗体herceptin阻断HER2，则PI3K/PAK信号通路被阻断，与运动有关的肌动蛋白细胞骨架的形成受到抑制[6]。磷酸蛋白snail可调节上皮细胞向间叶细胞转化，这在早期癌向恶性侵袭发展的过程中起着重要的作用。PAK1通过磷酸化snail，使其在细胞核内大量聚集，增强其转录抑制子的作用，抑制一些细胞连接蛋白的转录，增加细胞的恶性侵袭。最近有证据表明，乳腺癌中的PI3K/PAK1/p38 MAPK被激活，而Akt或p70S6K却未被激活，且PAK1在Ⅱ期乳腺癌中有更高的表达。提示该基因可能在肿瘤的发生发展中起重要的作用。

本实验结果表明PAK1在胃癌组织中的阳性表达率明显高于在正常胃组织中的阳性表达率，PAK1的阳性表达率与胃癌的淋巴转移、肿瘤浸润深度、临床分期呈正相关，与肿瘤的病理分化程度呈负相关（P＜0.05），随着肿瘤病理分化程度的降低而增高，提示PAK1蛋白的持续表达可能进一步参与胃癌的恶性演进过程，而且极有可能成为反映胃癌恶性程度的参考指标之一。检测PAK1蛋白可以更准确的判断胃癌的生物学行为，预测患者的预后，指导临床治疗，且为开发新的抗癌药物和寻求新的基因治疗的靶基因提供新思路。

[1] Bugheri Yarmand H,Mandal M,Taludker AH,et al.Etk/Bmx tyrosine kinase activates Pakl and regulates tumorigenicity of breast cancer cells[J].J Biol Chem,2001,276(31):29403.

[2] Schurmann A.p21-activated kinase 1 phosphorylates the death agonist bad and protects cells from apoptosis[J].Mol Cell Biol, 2000,20(2):453.

[3] Vadlamudi RK.Dynein light chain 1,a p21-activated kinase 1-interacting substrate, promotes cancerous phenotypes[J].Cancer Cell, 2004,5(6):575.

[4] Fan S.Role of NF-kappaB signaling in hepatocyte growth factor/ scatter factor-mediated cell protection[J].Oncogene,2005,24(10): 1749.

[5] Balasenthil S.Estrogen receptor activation at serine 305 is sufficient to upregulate cyclin D1 in breast cancer cells[J].FEBSLett, 2004,567(2-3):243.

[6] Adam L.Heregulin regulates cytoskeletal reorganization and cell migration through the p21-activated kinase-1 via phosphatidylinositol-3 kinase[J].J Biol Chem,1998,273(35):28238.

R735.2

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：1671-8194（2014）02-0053-02