一株解钾解磷菌株的筛选

王金昌，郑国华，傅筱冲

(江西省科学院微生物研究所，江西 南昌330096)

化学肥料的长期低效施用，会造成土壤中某些矿质元素的过度积累和土壤理化性质的变化，而且会引起环境污染，影响人类健康。研究人员发现植物根际促生细菌(plant growth promoting rhizohacteria，PGPR)能够极大的减少这些化学肥料的利用。本实验分离筛选到一株能解钾又能解磷的路德维希肠杆菌，并对其促生性能进行试验。

1 材料与方法

1.1 培养基

钾细菌分离培养基:葡萄糖10.0 g，Na2HPO40.2 g，MgSO4·7H2O 0.2 g，NaCl 0.2 g，CaSO4· 2H20 0.2 g，CaCO35.0 g，琼脂15.0 g，钾长石粉(200目)2.5 g，去离子水1 000 mL，pH 7.2。

有机磷培养基:葡萄糖10 g，NaCl 0.3 g，MgS04·7H2O 0.3 g，MnSO4·4H2O 0.03g，CaCO35 g，琼脂15～18 g，pH 7.0～7.5，(NH4)2SO40.5 g，KCl 0.3 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，酵母膏0.4 g，卵磷脂2 g，蒸馏水1 000 mL，121℃灭菌20 min。

1.2 样品采集

菜园土壤。

1.3 分离筛选方法

样品+无菌水，梯度稀释，涂布在钾细菌分离培养基平板上，28℃培养，挑取产生明显溶解圈的单菌落，纯化后保存。

1.4 上清液速效钾测定

准确称取0.5 g钾矿粉到95 mL解钾培养基(无钾)中，121℃灭菌20 min，待测菌悬液以5%的接种量接入摇瓶菌种，每个菌种做3个平行，同时设无接种对照37℃，160 rpm/min培养25 d，离心培养液，吸取4 mL离心上清液，利用火焰分光光度计法测钾。

1.5 平板检测分离到的细菌的解磷能力

用灭菌牙签挑取菌株的单菌落点植于有机磷平板上，将平板倒置于30℃恒温箱中培养5 d，观察菌落生长情况及透明圈产生情况。

1.6 有机磷液体培养中解磷能力测定

待测菌悬液以5%的接种量接种到有机磷液体培养基，置30℃，160 rpm/min振荡培养5 d后，离心取2 mL上清液，采用K2S2O4消解，磷钳蓝比色法测定上清液磷含量。

1.7 菌种鉴定

细菌16S rDNA鉴定:收集LB培养液中培养的菌体，采用UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒提取细菌的总DNA。……