铁苋菜适宜产地加工方法研究

魏学军， 林先燕， 李雪营， 赵鸿宾， 刘文兰

（1.黔南民族医学高等专科学校， 贵州 都匀 558001； 2.北京中医药大学， 北京 100029）

铁苋菜适宜产地加工方法研究

魏学军1， 林先燕1， 李雪营1， 赵鸿宾1， 刘文兰2

（1.黔南民族医学高等专科学校， 贵州 都匀 558001； 2.北京中医药大学， 北京 100029）

目的 比较不同加工方法和贮藏时间对铁苋菜中没食子酸和总黄酮的影响，为铁苋菜的产地加工提供科学依据。 方法 采用 HPLC法和 UV法分别测定没食子酸和总黄酮的量。 结果 不同加工方法对铁苋菜中没食子酸和总黄酮的影响显著， 趁鲜切段后 80 ℃烘干效果最佳， 全草阴干效果最差， 趁鲜切段后晒干与趁鲜切段后80 ℃烘干差异不明显。相同贮藏时间内，全草晒干和趁鲜切段晒干没食子酸和总黄酮量差异显著。结论 从节约资源和利于贮藏的角度考虑，建议铁苋菜采用趁鲜切段晒干的产地加工方法。

铁苋菜； 没食子酸； 总黄酮； 高效液相色谱法； 紫外-分光光度法； 产地加工方法

铁苋菜为大戟科植物铁苋菜 Acalypha australis L.的干燥全草，广泛分布在长江以南各省区，主要含黄酮、生物碱、鞣质等化学成分，具有清热利湿、收敛止血的功能［1］。 由于资源丰富， 疗效显著，在贵州苗族聚集区被广泛应用，是一种重要的药食同源品种， 苗药亦称 “海蚌含珠”［2］， 具有良好的开发利用前景。目前铁苋菜的研究多以化学成分和药理作用为主，作为影响药材品质关键因素的产地加工方法， 虽有全草晒干［2-3］和趁鲜切段晒干［1，3］的记载，但标准并不统一，质量难以得到保证，亟待予以规范，相关的研究至今未见文献报道。

铁苋菜中没食子酸和总黄酮具有抗菌消炎、止泻、止血、平喘、抗衰老和增强机体免疫等广泛的药理作用［3-8］， 是铁苋菜的重要 活性成 分。 本实验以上述两种成分作为考察指标，选择全草和趁鲜切段两种外观性状铁苋菜采用不同方法进行干燥并测定两种成分的量，结合药材在相同贮藏时间内两种成分的量的变化，探讨铁苋菜合理的产地加工方法，为其质量控制标准的建立提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 LC-10ATvp 高效液相色谱仪 （日本岛津公司）； SPD-10Avp 检测器 （ 日本岛津公司）；WMLSP色谱工作站 （南宁威玛龙公司）； Cary 100型双光束紫外可见分光光度计 （北京安捷伦公司）； SG-4050C型数显恒温水浴锅 （上海硕光公司）； 2.0R型 低 速 离心机 （ 德 国 HERAEUS）；DHG-9240A真空干燥箱 （上海金山公司）； AE240型电子天平 （瑞士 METTLER）。

1.2 材料 加工所用铁苋菜新鲜药材均于 2011 年7 月采自本校植物园试验田地 （样品编号 110715），除杂后按全草和趁鲜切段两种性状分别干燥，得样品 A1～A10。 另将两种性状药材晒干后装入密封纸袋， 室温下自然贮藏， 得样品 B1～B6。 以上各样品均制备3批次备用。药材经贵阳中医学院李江教授鉴定为大戟科植物 Acalypha australis L.铁苋菜的干燥全草，样本凭证留存于本校中药标本室。没食子酸 （批号 110831-200803）、芦丁 （批号：100080-200707） 对照品购自中国食品药品检定所，乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 没食子酸和总黄酮的测定

2.1.1 没食子酸测定的色谱条件 Diamonsil C18色谱柱 （250 mm×4.6 mm， 5 μm）， 流动相为乙腈-0.05%磷酸 （4 ∶96）， 检测波长 270 nm， 柱温为室温， 体积流量 1mL/min，进样量 10 μL， 理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于 6 000。 色谱图见图1。

图1 没食子酸对照品 （A） 和供试品 （B） HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatogram s of gallic acid reference substance（ A） and sam p le（ B）

2.1.2 供试品溶液的制备 精密称取过 3 号筛干燥至恒重的不同样品铁苋菜粉末 2.0 g， 以水为溶媒， 用量 20 倍， 水浴温度 80 ℃， 回流提取 2 次，每次3 h， 提取液过滤、 离心后定容至100 mL量瓶中，摇匀，冷藏备用。

2.1.3 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品 22.5 mg， 用流动相定容至 100 mL量瓶中，摇匀后作为没食子酸对照品贮备液。

精密称取芦丁对照品 20 mg， 加入 60%乙醇溶解并定容至 100 mL量瓶中， 摇匀后即得芦丁对照品溶液。

2.1.4 标准曲线的制备 精密移取1mL没食子酸对照品贮备液置10 mL量瓶中， 用流动相定容至刻度。 精密移取不同体积对照品溶液按 “2.1.1” 项色谱条件进行测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标作标准曲线， 得线性方程为 Y=1.530 2 × 106X+219.198 9， r=0.999 9。 试验结果表明对照品在 0.022 5 ～0.225 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密 移 取 芦 丁 对 照品 溶 液 0.0、 0.5、 1.0、1.5、 2.0、 2.5、 3.0 m L分别置于 10 mL量瓶中，加 60%乙醇至5 mL， 加5%亚硝酸钠溶液0.5 mL，摇匀放置 6 min， 再加 10%硝酸铝溶液 0.5 m L， 摇匀放置 5 min， 加 4%氢氧化钠溶液 4 mL， 摇匀放置 12 min。 对芦丁标准溶液显色后在波长 400 ～700 nm 区间进行扫描， 确定 最 大吸收波长 为515 nm。以第一管溶液作为空白对照， 在 515 nm处分别测定吸光度，以芦丁进样量为横坐标，吸光度为纵坐标作标准曲线， 线性方程为 Y=7.571 0X+ 0.001 2， r=0.999 3。 试验结果表明对照品在10 ～ 60 μg范围内线性关系良好。

2.1.5 精密度试验 取没食子酸对照品溶液， 连续进样6 次， 按 “2.1.1” 项色谱条件测定， 没食子酸的 RSD值为 0.87%。

取芦丁对照品溶液 2.0 mL， 按 “2.1.4” 项标准曲线制备条件连续测定 6 次， 芦丁的 RSD值为 0.71%。

2.1.6 稳定性试验 取没食子酸对照品溶液， 按“2.1.1” 项色谱条件， 分别在 0、 2、 4、6、 8 h 测定， 没食子酸的 RSD值为 1.92%， 说明没食子酸在8 h内稳定。

取芦丁对照品溶液 2.0 mL， 按 “2.1.4” 项标准曲 线 制 备 条 件 在 0、 30、 60、 90、 120、 150、180 min 各测定 1 次， 芦丁的 RSD值为 1.80%， 说明芦丁在 180 min 内稳定。

2.1.7 重复性试验 取 A1第 1 批次样品5 份， 按“2.1.2” 项 制 备供试品溶 液， 微孔滤膜 （0.45 μm） 过滤， 按 “2.1.1” 项色谱条件测定， 没食子酸的 RSD值为 1.76%。

取 A1第 1 批次样品 5 份， 按 “2.1.2”项制备供 试 品 溶 液，取 供 试 品 溶 液 2.0 mL， 按“2.1.4” 项标准曲线制备条件测定， 芦丁的 RSD值为2.31%。

2.1.8 加样回收率试验 取已知含没食子酸量的A1第1 批次样品铁苋菜粉末各5 份，加入适量没食子酸对照品，按 “2.1.2” 项制备供试品溶液，在 “2.1.1”项色谱条件下测定， 没食子酸平均回收率为 98.54%，RSD值为 1.72%。

取已知含黄酮量的 A1第 1批次样品铁苋菜粉末各5 份， 加入适量芦丁对照品， 按 “2.1.2” 项制备供 试 品 溶液， 取供试品溶液 2.0 mL， 按“2.1.4” 项标准曲线制备条件测定， 芦丁平均回收率为 99.08%， RSD值为 2.18%。

2.1.9 样品测定 精密移取不同批次样品经提取所得供试品溶液， 微孔滤膜 （0.45 μm） 过滤， 按“2.1.1” 项色谱条件测定没食子酸，测定值为 3批次的均值。 结果见表 1、 表 2。

表1 不同加工方法铁苋菜中没食子酸和总黄酮的比较 （n=3）Tab.1 Com parison of gallic acid and total flavonoids contents in Acalypha Australis by different processing methods（n=3）

表2 不同贮藏期铁苋菜中没食子酸和总黄酮的比较（mg/g， n=3）Tab.2 Com parison of gallic acid and total flavonoids contents in Acalypha Australis from different storage times（mg/g， n=3）

精密移取同一样品不同批次提取所得供试品溶液 2.0 mL， 按 “2.1.4” 项标准曲线制备条件测定总黄酮， 测定值为 3批次的均值。 结果见表 1、表2。

由表1结果可知，两种性状铁苋菜没食子酸的量均以阴干最高， 100 ℃烘干最低。 原因可能是没食子酸作为鞣质的水解单元，由于阴干持续时间长，水分蒸发缓慢，在干燥过程中，仍有部分鞣质水解所致；而烘干水分蒸发快，鞣质水解受阻，因而含有量较低。两种性状铁苋菜总黄酮的量均以80℃烘干最高， 阴干品中含有量最低， 原因可能与药材的生理活性是否失活有关。随烘干温度的升高，水分快速蒸发，致使药材中部分物质和细胞失活，减少了维持新陈代谢所需的营养物质消耗，因而总黄酮量较高；阴干使药材失活的过程缓慢，需消耗营养物质维持一定的新陈代谢，因而含有量较低。 100 ℃烘干总黄酮量有所下降， 可能与高温下黄酮类成分被破坏有关。

为考察各种加工方法的效果，将没食子酸和总黄酮两种成分的量各按 0.5 的权重系数进行综合评分，并对试验结果予以比较分析。方差分析表明，不同干燥方法对两种性状药材没食子酸和总黄酮量的影响具有显著差异； 趁鲜切段 80 ℃烘干效果最佳， 全草阴干效果最差， 趁鲜切段80℃烘干和趁鲜切段晒干的效果无显著性差异。同一干燥方法对两种性状药材没食子酸和总黄酮量的影响具有显著差异，趁鲜切段晒干的效果优于全草切段晒干。提示产地加工时，从节约资源的角度，可采用趁鲜切段后晒干的加工方法。

由表2结果可知，两种性状铁苋菜晒干后随贮藏时间的延长，没食子酸和总黄酮的量整体呈下降趋势。方差分析表明，相同贮藏时间内，两种性状药材中没食子酸和总黄酮的量差异显著，切段贮藏优于全草贮藏。 贮藏 12月， 全草药材和切段药材中没食子酸含量分别降低 47.71%、30.60%， 原因可能是切段后药材表面积增大，吸湿性增强，导致部分鞣质水解，因而含有量降低较小；总黄酮量分别降低 69.21%、 66.59%。提示从利于贮藏的角度考虑，宜选择趁鲜切段晒干后贮藏。

3 讨论

3.1 中药药效的物质基础是多种成分共同作用的结果已成为一种共识，鉴于目前铁苋菜的质量控制标准不明确的情况，本实验选择铁苋菜中没食子酸和总黄酮两种活性成分作为考察指标，更能体现综合评价铁苋菜产地加工的质量标准，较选择单一指标的评价更为科学、合理。此外，随着对其化学成分和药理作用研究的深入，其质量控制指标的选择仍需不断探讨。

3.2 实验结果表明， 不同加工方法对铁苋菜产地加工和贮藏过程中活性成分的量影响显著。由测定结果分析可知，如铁苋菜以没食子酸和总黄酮作为质量控制指标，采用趁鲜切段晒干加工方法得到的生药品质好并利于贮藏。该结果同时验证了文献［1］ 记载的加工方法是科学、 合理的。

3.3 本实验供试品溶液的制备方法， 是根据铁苋菜中没食子酸和总黄酮水溶性较强、稳定性较好的特点，选用水为溶媒，比较回流、超声、微波 3种方法的提取效率，结果以回流法最佳。继而采用正交试验设计对影响回流提取的四个因素：液固比、提取温度、提取时间和提取次数进行优化，最终确定了提取方法。

3.4 关于流动相的选择， 本实验参考相关文献资料［9-12］， 对各种溶剂系统作了比较， 结果表明， 采用本实验流动相，分离效果好，峰形漂亮，保留时间适宜，较好消除了各种干扰峰的影响。

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［ 3 ］ 南京中医药大学.中药大辞典［M］.2 版.上海： 上海科学技术出版社， 2006： 2601-2602.

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Different processing methods of Acalypha australis in the habitats

WEIXue-jun1， LIN Xian-yan1， LIXue-ying1， ZHAO Hong-bin1， LIUWen-lan2
（1.Qiannan Medical College for Nationalities， Duyun 558001， China； 2.Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

Acalypha Australis； gallic acid； total flavonoids； HPLC； UV； different processingmethods in the habitats

R283

： A

： 1001-1528（2014）05-1030-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.031

2013-06-04

贵州省教育厅自然科学研究资金项目 （20090119）； 黔南民族医学高等专科学校资金项目 （QNYZ200902）

魏学军 （1972—） ， 男， 副教授， 从事中药与民族药质量控制研究。 Tel： （0854） 8308038 ， E-mail： qndywxj@163.com