HPLC法同时测定天舒胶囊中阿魏酸和天麻素

赵 辉， 武晓红， 蒲晓辉

（河南大学药学院， 河南 开封 475004）

HPLC法同时测定天舒胶囊中阿魏酸和天麻素

赵 辉， 武晓红， 蒲晓辉*

（河南大学药学院， 河南 开封 475004）

目的 建立用高效液相色谱同时测定天舒胶囊中阿魏酸和天麻素的方法。 方法 采用 Thermo C18色谱柱 （250 mm×4.6 mm， 5 μm）； 流动相为甲醇-1%冰醋酸， 梯度洗脱； 体积流量为 1.0 mL/min； 检测波长为 270 nm； 柱温为30 ℃。 结果 天麻素、 阿魏酸分别在 10.125 ～162.0 μg/mL（r=0.999 7）、 5.375 ～86.0 μg/mL（r=0.999 8）范围内有良好的线性关系。 平均回收率分别为 98.58%、 99.01% （n=9）， RSD分别为 1.75%、 1.90%。 结论 该方法简便，稳定准确，重复性好，可用于天舒胶囊的质量控制。

高效液相色谱法；天舒胶囊；天麻素；阿魏酸

天舒胶囊由川芎、天麻两味中药组成，具有活血平肝， 通络止痛之功效［1］。 多用于血管神经性头痛即偏头痛［2-7］，对急 性缺血性脑 血管病 也有较好的防治作用［8］。 川芎主要成分为阿魏酸，有抗血小板凝集、抗血栓、抗菌、消炎、抗肿瘤、抗突变、增加免疫力、清除亚硝酸盐、氧自由基、过氧化亚硝基等功能并具有增强人体精子活力和运动性等药理作用［9-10］。 天麻素作为天麻的主要活性成分之一，不仅可以治疗眩晕、头痛，也可作为高血压的辅助治疗［11］， 在防治中枢神经系统疾病等方面也发挥着 重 要 作用［12-14］。 因 此 本实 验 以 阿魏 酸 和天麻素作为指标成分，用高效液相色谱法进行测定，该方法简便，稳定准确，重复性好。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪， UV1600 紫外分光光度仪 （北京瑞利分析仪器公司），pHS23C型精密 pH计 （上海雷磁仪器厂） ， SB2200 型超声仪 （上海超声仪器厂）。

1.2 试剂与试药 甲醇 （色谱纯）； 阿魏酸对照品 （中国药品生物制品检定所，批号 0773-9910），天麻素对照品 （中国药品生物制品检定所，110807-200205）； 娃哈哈纯净水； 磷酸 （分析纯）；天舒胶囊 （批号 100901、 100902、100903） 每粒0.34g，江苏康缘药业生产。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Thermo C18色谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）； 以甲醇 （A） -1%冰醋酸溶液 （B）为流动相，梯度洗脱 ［0 ～10 min （13%A）， 10 ～15 min （13% ～40%A）， 15 ～35 min （40% ～70% A）， 35 ～40 min （ 70% ～13%A）， 40 ～43 min（13%A）］； 检测波长为 270 nm；柱温为 30 ℃；体积流量为 1.0 mL/min。 理论塔板数按天麻素和阿魏酸计算均不低于 2 500。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取天麻素与阿魏酸对照品适量，加 70%甲醇，制成每 1 mL含天麻素与阿魏酸分别为 81.0 μg和 43.0 μg的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 精密称取天舒胶囊内容物约0.5 g， 加 70%甲醇 50 mL， 精密称定。 超声提取30 min， 放冷， 用 70%甲醇补足质量， 离心， 用微孔滤膜 （0.22 μm） 过滤， 即得。

2.2.3 阴性对照液的制备 取不加天麻、川芎药材的供试品， 按 “2.2.2” 项下方法制备阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验 取上述对照品溶液、 供试品溶液、阴性对照品溶液， 按 “2.1”项下色谱条件进行分析， 记录色谱图， 见图1。 理论塔板数按天麻素和阿魏酸计算均不低于2 500， 峰分离良好，阴性对照无干扰。

图1 HPLC谱图Fig.1 HPLC chromatograms

2.4 线性关系考察 分别精密量取天麻素、 阿魏酸混合对照品溶液用 70%甲醇稀释至含天麻素10.125、20.25、 40.5、81.0、 162.0 μg/mL， 阿魏酸 5.375、 10.75、 21.5、 43.0、 86.0 μg/mL的系列混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行测定，记录峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品质量浓度 （μg/mL） 为横坐标进行线性回归。 天麻素和阿魏酸的回归方程分别为 Y=3 378.1X-14 796，r=0.999 7； Y=40 694X+25 749， r=0.999 8。 结果表明天麻素在 10.125 ～162.0 μg/mL、 阿魏酸在 5.375 ～86.0 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取混合对照品 （天麻素 40.5 μg/mL， 阿魏酸 21.5 μg/m L）， 重复进样 6 次， 按“2.1”项下色谱条件测定， 结果天麻素和阿魏酸峰面积的 RSD分别为 0.73%、 0.67%。

2.6 稳定性试验 取样品适量 （批号 100901），按 “2.2.2” 项下的方法制备供试品溶液， 分别在0、 2、 4、 6、 8、12 h 进行测定， 结果天麻素、 阿魏酸峰面积的 RSD分别为 1.16%， 1.35%， 表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 加样回收率试验 取已知含有量的样品 （批号 100901）， 精密称定， 精密加入 2 m L高中低不同质量浓度的混合对照品各 3 份， 按 “2.2.2” 项下供试品溶液制备方法制备 9 份样品， 按 “2.1”项下色谱条件测定， 计算回收率， 结果见表1。

表 1 加样回收率试验结果 （n=9）Tab.1 Results of recovery tests（n=9）

2.8 样品测定 取样品适量， 精密称定， 按“2.2.2” 项下方法制备供试品溶液， 按 “2.1” 项下色谱条件进行测定，记录色谱图，计算天麻素、阿魏酸的质量分数， 结果见表2。

表2 样品测定结果 （n=3）Tab.2 Determ ination results of sam Ples（ n=3）

3 讨论

《中国药典》 2010 年版中收载的天舒胶囊其指标性成分天麻素和阿魏酸是分别测定的，其中流动相体系不同，溶液的配制方法不同，比较繁琐。本实验设计了梯度洗脱同时测定两个指标性成分的量，操作简单，结果可靠，分析速度快。

3.1 检测波长的选择 分别对天麻素和阿魏酸对照品溶液在 190 ～400 nm波长内进行扫描，结果天麻素在 270 nm处有最大吸收、 阿魏酸在 322 nm处有最大吸收并且在 270 nm处有较大吸收。通过对两波长下的高效液相色谱图比较， 发现在 270 nm处天麻素和阿魏酸色谱峰分离良好，且灵敏度较高， 故选择270 nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择 由于天麻素和阿魏酸两种成分极性差异较大，因此采用梯度洗脱并考察了不同的 流 动 相［15-19］： 甲 醇-磷 酸 盐 缓 冲 溶 液、 甲 醇-0.01%磷酸溶液、 乙腈-0.05% 磷酸溶 液、 甲 醇-1%冰醋酸溶液。 结果表明采用甲醇-1%冰醋酸系统为流动相时，天麻素和阿魏酸峰峰形较好，且保留时间适中，无干扰峰， 故本实验采用甲醇-1%冰醋酸溶液作为流动相。

3.3 样品提取方法的选择与优化 考察了多种提取方法，如超声提取、回流提取、索氏提取。结果表明，超声提取操作简单，提取时间短，提取率高。又分别对提取溶剂［15，18，20-21］（ 纯甲醇、 80%甲醇、 70% 甲 醇、50% 甲 醇、 75% 乙 醇、 50% 乙醇）、 提 取 时 间 （ 20 min、 30 min、 40 min、 50 min、 60 min） 进行了筛选。 结果表明， 采用 70%甲醇超声提取 30 min 为最佳提取条件， 提取完全，提取率高。

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Determ ination of gastrodin and ferulic acid in Tianshu CaPsules by HPLC

ZHAO Hui， WU Xiao-hong， PU Xiao-hui*
（College of Pharmacy， Henan University， Kaifeng 475004， China）

HPLC； Tianshu Capsules； gastrodin； ferulic acid

R927.2

： A

： 1001-1528（2014）01-0111-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.01.027

2013-02-26

赵 辉 （1978—） ， 女， 硕士生， 主要从事药物新剂型及质量分析研究。 Tel： （0371） 23880680， E-mail： tzz1113@163.com

*通信作者： 蒲晓辉 （1980—）， 男， 博士， 硕士生导师。