密码子优化型鸭甲肝病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达

李传峰，陈宗艳，孟春春，梁瑞英，胡 文，刘光清

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

·研究论文·

密码子优化型鸭甲肝病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达

李传峰，陈宗艳，孟春春，梁瑞英，胡 文，刘光清

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

为了提高基因A型鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus，DHAV）VP1基因在昆虫细胞中的表达水平, 本研究根据昆虫细胞密码子偏爱性对野生型DHAV VP1（wtVP1）基因进行改造, 合成了optiVP1基因，并利用Bac-to-Bac表达系统构建了重组杆状病毒rBacmid-wtVP1和rBacmid-optiVP1, 分别转染对数生长期的sf9昆虫细胞表达VP1蛋白。转染72 h后，sf9细胞出现典型的细胞病变（cytopathic effect，CPE）, Western-blot和间接免疫荧光法（indirect immunof uorescence assay，IFA）检测结果表明VP1蛋白在重组杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得了良好表达。用Image J软件对 Western-blot扫描的图片进行灰度分析发现，optiVP1基因在昆虫细胞中的表达水平明显高于wtVP1。本研究为进一步研制诊断抗原和新型基因工程疫苗的开发奠定了基础。

鸭甲肝病毒； VP1；重组杆状病毒；密码子优化

根据国际病毒学分类委员会2012年发表的最新病毒学分类第9次报告，鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus, DHAV）目前是小RNA病毒科（Picornaviridae）、禽肝病毒属（Avihepatovirus）的唯一成员[1]。DHAV主要包括3个基因型或血清型，即基因A、B和C型或血清1、2和3型[2,3]。其中，基因A型（或血清1型）DHAV为呈世界性分布的经典毒株[4-6]；基因B型（或血清2型）DHAV仅出现中国的台湾地区[7]；基因C型（或血清3型）DHAV主要分布于韩国和中国大陆[2,3,8,9]。DHAV能引起雏鸭的一种急性高度致死性传染病，即鸭病毒性肝炎（duck viral hepatitis, DVH），主要侵害4周龄以内的雏鸭，特别是1周龄以下的雏鸭最易感，死亡率可达到90%以上，严重危害了养鸭业的健康发展。……