多重PCR鉴定三种颚口线虫方法的建立

李树清，李雯雯，张鸿满，陈韶红，李 健，陈志飞，王巧全，张永年，黄维义

（1. 上海出入境检验检疫局，上海 200135；2. 中山大学附属第一医院动物实验中心，广州 510080；3. 广西疾病预防控制中心，南宁 530021； 4. 中国疫病预防控制中心寄生虫病预防控制所，上海 200025；5. 广西大学动物科学技术学院，南宁 530005）

多重PCR鉴定三种颚口线虫方法的建立

李树清1，李雯雯2，张鸿满3，陈韶红4，李 健5，陈志飞1，王巧全1，张永年4，黄维义5

（1. 上海出入境检验检疫局，上海 200135；2. 中山大学附属第一医院动物实验中心，广州 510080；3. 广西疾病预防控制中心，南宁 530021； 4. 中国疫病预防控制中心寄生虫病预防控制所，上海 200025；5. 广西大学动物科学技术学院，南宁 530005）

为了建立快速、灵敏、可靠的鉴别颚口线虫虫种的方法，根据GenBank中发表的棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫ITS-2序列，设计了3对特异引物，建立了这3种颚口线虫的单一PCR和多重PCR检测方法，并分别对单一PCR和多重PCR方法的特异性和敏感性进行了鉴定。结果显示单一PCR和多重PCR均能特异扩增出棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫，其片段大小分别为282、358、183 bp，单一PCR对棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫虫体DNA最小检出量分别为0.2、0.01、0.01 ng/μL。对宫脂线虫、异尖线虫、棘口吸虫以及迭宫绦虫均不能进行扩增。用建立的多重PCR方法对菲律宾、印度尼西亚、黑龙江颚口线虫等12条颚口线虫DNA模板进行扩增，经鉴定菲律宾与印度尼西亚的颚口线虫为棘颚口线虫，黑龙江的颚口线虫为日本颚口线虫。鉴定结果与原虫体样本的形态鉴定和测序分析结果一致。……