复方中药痤疮凝胶对兔耳痤疮模型治疗作用的实验研究*

夏庆梅，景春晖，杜天乐

（天津中医药大学，天津 300193）

复方中药痤疮凝胶对兔耳痤疮模型治疗作用的实验研究*

夏庆梅，景春晖，杜天乐

（天津中医药大学，天津 300193）

[目的]采用Kligman法，建立兔耳痤疮模型，观察复方中药痤疮凝胶对兔耳实验性痤疮的治疗作用。[方法]煤焦油稀释液（95%乙醇配成的2%浓度煤焦油溶液）外涂于兔耳内侧导管开口处2 cm×2 cm范围，连续14 d。肉眼及病理确认兔耳痤疮造模成功。造模成功后将兔随机分为A、B、C三组，分别于皮损处外涂5%浓度复方中药痤疮凝胶、10%浓度复方中药痤疮凝胶、维A酸乳膏治疗。治疗两周后，根据分级标准对兔耳痤疮进行分级，统计学分析复方中药痤疮凝胶对兔耳痤疮模型的治疗作用。[结果]治疗两周后，维A酸组与5%、10%浓度复方中药痤疮凝胶组与治疗前相比均取得显著效果，但三组疗效间比较无显著性差异。[结论]复方中药痤疮凝胶对实验性兔耳痤疮模型有确切治疗效果。

复方中药痤疮凝胶；兔耳；痤疮治疗

痤疮是一种累及毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤病，多见于青春期男女，可表现为粉刺、丘疹、脓疱、囊肿、结节、瘢痕等皮损。患痤疮后，很多患者在情绪和行为方式上发生改变，且多伴随焦虑和抑郁[1]。有效的治疗可以使痤疮患者的心理健康，提高生活质量。近年来中西医对此病进行了深入的研究，均取得了一定疗效。但是，西药内服外用不良反应明显并易反复发作。传统中药外用剂型也有一定的不足，如软膏剂、霜剂会造成毛囊皮脂腺堵塞，甚至加重病情，洗剂容易受到汗水的影响使药物附着力下降，影响药效；酊剂气味刺鼻，对皮肤刺激性大。为了寻求一种有效、安全、方便、快捷且不含油类的外用中药制剂，笔者经过多年临床疗效观察，对外用中药组方进行优化，并利用现代科学技术对中药剂型进行改良，制成一种新型的凝胶制剂，其特点有疗效好，外观清澈透明，涂展性和透皮吸收效果好,无油腻感，不堵塞毛孔，用于痤疮的外治。

1 材料与方法

1.1 实验动物 成年新西兰大耳白兔22只，体质量2.0～3.0 kg。

1.2 实验药物与试剂 5%浓度复方中药（丹参、黄芩、白花蛇舌草、野菊花、红花、白薇、甘草）痤疮凝胶（天津中医药大学制剂中心制备）、10%浓度复方中药（丹参、黄芩、白花蛇舌草、野菊花、红花、白薇、甘草）痤疮凝胶（天津中医药大学制剂中心制备）、维A酸乳膏（重庆华邦制药股份有限公司生产）、煤焦油、95%浓度乙醇（山东利尔康消毒科技股份有限公司生产）。

1.3 动物造模 22只成年新西兰大耳白兔右耳内侧耳管开口处2 cm×2 cm范围，每天涂煤焦油稀释液（95%乙醇配成的2%浓度煤焦油溶液）0.25 mL一次，左耳不做任何处理作为对比，肉眼观察造模后兔耳皮损的情况和毛囊口有无角质栓等，连涂14d。随机取2只成年新西兰大耳白兔，用空气栓塞法处死，取下双耳导管开口处的全层皮肤，10%福尔马林液固定，脱水后用硬蜡进行包埋，然后切片并烘干。HE染色后进行常规病理观察，验证造模成功。

1.4 疗效判断标准

1.4.1 疗效肉眼判定标准

正常（0）：正常组织，无痤疮。

轻度（Ⅰ级）：粉刺为主要皮损，可有少量丘疹和脓疱。总病灶数少于30个。

中度（Ⅱ～Ⅲ级）：其中Ⅱ级有粉刺，伴有中等量的丘疹和脓疱。总病灶数在31～50个之间；Ⅲ级在粉刺基础上伴大量丘疹和脓疱，偶见大的炎性损害，分布广泛，有少数结节形成。总病灶数在51～100个之间。

重度（Ⅳ级）除上述皮损外，还伴有3个以上的结节或囊肿[2]。

1.4.2 疗效组织病理学判定标准 （－）为无痤疮；（+）为毛囊轻度角化，皮脂腺轻度增生或无明显增生；（++）毛囊面积轻度扩大，漏斗部可见中等量的角化物质，皮脂腺轻度增生；（+++）毛囊面积明显扩大，内有大量的角化物质，皮脂腺直径明显增大[3]。

1.5 统计学方法 采用SPSS18.0进行统计分析,等级资料用频数描述,等级资料治疗前后比较采用配对秩和检验，等级资料组间比较采用Kruskal－Wallis检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

1.6 复方中药痤疮凝胶对实验性痤疮的治疗作用20只成年新西兰大耳白兔造模成功后，随机选取18只再随机分为A、B、C 3组，每组6只。其余两只不做任何处理以便病理验证。A、B两组为治疗组，C组为对照组。3组分别经1.4.1判定标准分级，结果如表1所示。经秩和检验，3组兔耳肉眼皮损差异无显著性（P＞0.05），组间具有可比性。

表1 3组兔耳涂药前后肉眼观察统计Tab.1 Observation statistics before and after treatment in 3 groups obtained by naked eyes

A、B两组皮损处分别外涂5%、10%浓度复方中药痤疮凝胶，每日两次，每次1 mL，C组左耳皮损处外涂维A酸乳膏，每日1次，每次1 mL。14 d后肉眼观察兔耳皮损的恢复情况。然后用空气栓塞法将兔全部处死，取下左耳导管开口处的全层皮肤，采用10%福尔马林液固定，脱水后使用硬蜡进行包埋，然后切片并烘干。HE染色以后进行常规病理观察。

2 结果

2.1 兔耳肉眼观察及组织学判定 肉眼观察下，正常未造模兔耳表面光洁，呈淡粉白色，透光度好，兔耳导管开口处毛囊整齐排列，不见角栓，无粉刺（如图1）。造模3 d后毛孔开始变粗，周围皮肤开始角化。14 d造模完成后，兔耳增厚明显，毛囊口隆起，抚摸兔耳造模处皮肤表面感觉明显粗糙碍手，用手挤压可出现白色碎米汁状物和黑色角栓，结节数量显著增多（如图2）。皮损肉眼观察情况均符合1.4.1中描述的Ⅲ～Ⅳ级痤疮皮损程度，以Ⅳ级多见。

图1 未造模的正常兔耳Fig.1 Normal rabbit ear before molding

图2 14天造模后的兔耳痤疮模型Fig.2 Rabbit ear acne model after molding for 14 days

电子显微镜下观察，正常未造模兔耳表皮较薄，细胞排列整齐，角化正常，只有1层颗粒层；棘细胞为2～3层，透明层不明显，毛囊口未扩张，毛囊、真皮、表皮交界清楚可见（如图3）。造模完成后，兔耳角质层明显增厚，皮脂腺毛囊口充满角化栓塞物质，并向皮脂腺延伸。毛囊壁增厚，散在淋巴细胞浸润。棘细胞层增厚显著，由未造模前的2～3层变为7～10层，且明显变大。真皮浅层毛细血管扩张明显，淋巴细胞增多（如图4）。提示兔耳痤疮模型造模成功。

图3 电镜下未造模的正常兔耳（HE染色×200）Fig.3 Normal rabbit ear before molding under electron microscopy(HE×200)

图4 电镜下造模完成后的兔耳痤疮模型（HE染色×200）Fig.4 Rabbit ear acne model after molding under electron microscopy(HE×200）

2.2 复方中药痤疮凝胶对兔耳痤疮模型的治疗作用 用药14 d后，3组兔耳皮损均有不同程度改善（见图5～8，表1）。A组肉眼观察下兔耳表皮增厚有所减轻，角质物和皮脂腺分泌物较造模时明显减少，但仍有未治愈粉刺存在。镜下观察棘细胞层数由原来的7～10层恢复到4层，毛囊口扩张程度减轻，其内角化物疏松，炎症细胞有所减少。B组肉眼观察下兔耳表皮厚度以达正常水平，角质物和皮脂腺分泌物较造模时明显减少。镜下观察棘细胞层数已恢复到正常未造模兔耳的2～3层，炎症细胞明显减少，毛囊口扩张程度减轻，部分已恢复到正常水平。C组肉眼观察脱屑明显，表皮厚度已恢复到正常水平，摸之不粗糙碍手。电镜观察下C组棘细胞层数已恢复到4层水平，仍有少量疏松角化物质填充。真皮内炎症细胞减少。组织病理学统计情况见表2。

图5 A组兔耳涂药两周后镜下观察情况（HE染色×200）Fig.5 Condition of group A after treatment for 2 weeks under electron microscopy(HE×200)

肉眼直观观察：复方中药痤疮凝胶高剂量组（B组10%）效果优于复方中药痤疮凝胶低剂量组（A组5%）。但经统计学进行3组间两两比较得知，3组间无论肉眼或病理观察，差异均无统计学意义（P＞0.05）。故得出结论：经14 d治疗之后，维A酸组与5%、10%浓度复方中药痤疮凝胶组均可取得一定效果，但3组间疗效无显著性差异。

图6 B组兔耳涂药两周后镜下观察情况（HE染色×200）Fig.6 Condition of group B after treatment for 2 weeks under electron microscopy(HE×200)

图7 C组兔耳涂药两周后镜下观察情况（HE染色×200）Fig.7 Condition of group C after treatment for 2 weeks under electron microscopy(HE×200)

图8 B组兔耳涂药两周后肉眼观察情况Fig.8 Observation by naked eyes of group B after treatment for 2 weeks

表2 3组兔耳涂药两周后组织病理学判定统计Tab.2 Statistics of histopathological changes after treatment for 2 weeks in 3 groups

3 讨论

寻常痤疮中医之称“粉刺”，是一种累及毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤病，发病率高。临床多表现为丘疹、结节、脓疱、囊肿、瘢痕等皮肤损害。据报道，青春期患者寻常痤疮发病率高达82.7%，男性患病率高于女性[4]。西医多认为此病多与雄激素代谢异常、毛囊寄生物产生及繁殖、炎症与宿主免疫反应、5-α受体还原酶及Toll样受体2作用有关，此外还与遗传有密切关联。治疗寻常痤疮西医多采用抗生素、维甲酸、抗雄激素类药物为主。虽可取得一定治疗效果,但抗生素类药物不良反应较多，且肝肾毒性强[5]；维甲酸类药物使皮肤脱屑严重，且有严重肝毒性、眼毒性和致畸性[6]；抗雄激素类药会导致人体激素水平紊乱，尤其影响女性月经规律性，严重者可致不孕。中医辨证论治多将痤疮分为肺经风热、肠胃湿热、痰湿瘀滞三型。《医宗金鉴》有关粉刺记载曰：“此证由肺经血热而成。每发于面鼻，起碎疙瘩，形如黍屑，色赤肿痛，破出白粉汁，日久皆成白屑，形如黍米白屑。宜内服枇杷清肺饮，外敷颠倒散，缓缓自收功也。”因此有人从湿热论治本病[7]。笔者应用中医内外结合治疗方法治疗本病，取得很好疗效[8]。在此治疗基础上，进一步筛选临床确有疗效的外用中药，应用现代制剂技术，制成复方中药痤疮凝胶治疗寻常痤疮，取得显著疗效。本凝胶主要功效为清热凉血，散瘀止痛。凝胶中丹参有活血调经、祛瘀止痛、凉血消痈之功效。丹参中主要化学物质为丹参酮。丹参酮既对革兰阳性球菌,特别是耐药金黄色葡萄球菌有较强抗菌作用，也具有抗雄激素样作用[9]。有研究还证实了丹参酮有加快皮肤的新陈代谢的作用[10]。黄芩有清热燥湿，凉血解毒之功效。其体外抗菌作用良好[11]。现代医学研究证明黄芩中黄酮类物质具有强力抗炎作用，可有效降低毛细血管通透性，且剂量越高抑制作用越明显[12]。黄芩中所含的黄芩苷可通过抑制人皮脂细胞内雄性激素受体表达而具有抗雄激素样作用[13]。白花蛇舌草主清热解毒，利湿通淋。体外抗菌实验结果显示，白花蛇舌草总黄酮对常见的球菌和杆菌均有不同程度的抑菌和杀菌作用,此外还具有一定抗炎和抗雄激素作用，参与免疫调节，抑制皮脂腺分泌[14]。野菊花清热解毒功效卓著。现代药理研究证实，野菊花有较强的抗炎杀菌和提高免疫力的功能[15]。白薇有清热凉血，利尿通淋，解毒疗疮之功效，可有效治疗血热毒盛的疮痈肿毒，内服外敷均可[16]。红花擅活血通经、祛瘀止痛。现代医学证实其具有抗炎抗氧化效应、改善微循环并抑制毛细血管通透性增加的作用。甘草既可补脾益气，调和诸药，又能清热解毒，缓急止痛。甘草酸是从甘草中提取出的有效成分，由甘草酸合成的甘草锌具有类似激素抗炎、抗免疫等方面的作用，却没有激素样的不良反应[17]，故特别适合作为激素替代物治疗痤疮。七味药共奏清热凉血，散瘀止痛，活血消痈之疗效。有文献研究中药在体外对痤疮丙酸杆菌的抑制作用后发现黄芩单体成分小檗碱表现出良好的抑制痤疮丙酸杆菌活性的效果[18]。此外，笔者研制的复方中药痤疮凝胶制剂既克服了传统乳膏、软膏等易阻塞皮脂腺的缺点，也克服了酊剂、洗剂、擦剂的刺激性大或给药吸收率差的问题。该凝胶水溶性强，以低浓度卡波姆为基质，具有易涂展，无油腻性和刺激性等特点，附着性和均匀性良好，显著提高药物利用率；加入甘油和尼泊金乙酯对药物起到一定防腐、缓冲和润滑作用；同时选择两种渗透促进剂合用也增强了中药的利用度和透皮吸收效果。由此可见，复方中药痤疮凝胶是中医外科经皮给药治疗痤疮的最好选择。

本研究肉眼观察，发现10%中药浓度痤疮凝胶皮损恢复情况较5%中药浓度痤疮凝胶皮损恢复相对较好，但是经过统计学验证没有意义。有待今后深入研究。

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Experimental study of compound Chinese medicine acne gelatum on acne on rabbit ear

XIA Qing-mei,JING Chun-hui,DU Tian-le
（Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To establish an acne model of rabbit ear and then observe the therapeutic effect of compound traditional Chinese medicine acne gel.[Methods]Pix carbonis dilution(2%concentration of pix carbonis solution with 95%concentration of alcohol)was applied to inside surface of rabbit ears for successive 14 days to prepare the experimental acne model on rabbit ear.The models were confirmed by both naked eye and pathology examination.They were then divided into group A,B,and C randomly,applying 5%acne gel, 10%acne gel and tretinoin to the lesions respectively.After treatment for two weeks,the acne was classified according to a standard and the therapeutic effects was compared between these three groups.[Results]In contrast,these three treatments showed remarkable therapeutic effects compared with before.But the differences among three groups were not significant.[Conclusion]Compound Chinese medicine acne gel has a specific therapeutic effect on experimental rabbit ear acne models.

compound Chinese medicine acne gel;rabbit ear;acne therapeutics

R285.5

：A

：1672-1519（2014）05-0296-05

2013-12-11）

（本文编辑：马 英，张震之）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.05.16

国家自然科学基金面上项目（81373789）；天津市中医药管理局中医中西医结合项目（11024）。

夏庆梅（1965-），女，副教授，长期从事皮肤及皮肤美容的教学和临床工作。