环丙沙星对犬软骨细胞增殖的影响

2014-04-20 01:35陈旭明谢鹏飞史秋盛
中国畜牧兽医文摘 2014年12期
关键词:环丙沙星无水乙醇培养液

陈旭明 谢鹏飞 史秋盛

(江苏省溧阳市竹箦镇畜牧兽医站,江苏溧阳 213300)

1 实验准备

1.1 软骨细胞来源

原代犬关节软骨细胞进行细胞扩增培养。

1.2 试剂

DMEM/F12培养基,胰蛋白酶,无水乙醇,MTT,环丙沙星盐酸盐等。

2 实验方法

MTT法检测环丙沙星对软骨细胞增殖的影响:取第3代软骨细胞104个/ml密度接种于96孔板,置于CO2培养箱培养。待细胞贴壁后换液培养3 d,加入0.05、0.10、0.15g/L浓度的环丙沙星,于24 h、72 h、120 h检测,测定前4 h弃去旧培养液,加入100 μl无血清DMEM/F12培养液(含5 g/L的MTT10μl),37℃培养箱内孵育4 h,弃去MTT,加入150 μl无水乙醇,振荡10 min,选取490 nm波长,用酶标仪读取OD值,记录数据。

3 实验结果

软骨细胞中加入环丙沙星后,与对照组相比,软骨细胞增殖受到明显的抑制作用,随时间延长抑制作用增大,随着剂量增大抑制作用增大(详见表1和图1),从表中和图中均可以看出,0.15 g/L浓度的环丙沙星抑制软骨细胞增殖作用最大。

表1 环丙沙星对软骨细胞增殖的影响

图1 环丙沙星对软骨细胞增殖的影响

4 实验讨论

目前,对QNs的软骨毒性是否会影响儿童生长发育,是个争议较大的问题,国内外众多的动物实验结果均表明QNs确实对幼龄动物负重关节软骨有损伤作用,其损伤程度与动物的年龄和药物浓度有关,年龄越小药物浓度越大,关节软骨损伤越严重[1,2]。并且在同等浓度下,环丙沙星对犬软骨细胞生长抑制率随培养时间的延长而增高[3]。

通过本实验证实0.05、0.10、0.15g/L浓度的环丙沙星对体外培养的犬软骨细胞具有抑制生长的作用,抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。随着时间延长,抑制作用增强;随着剂量增加,抑制作用增强。

[1] 曲芬,姜素椿,王力娜,等.环丙沙星对胎儿软骨发育的影响[J].中华内科杂志,1998,37(4):239.

[2] Stahlmann R,ZippelU,Forster C,et al.Chondrotoxicity and toxicokinetics of sparfloxacin in juvenile rats[J].Antimicrob Agents Chemother,1998,42(6):1470.

[3] 刘健,魏莉,王永秀,等.喹诺酮类药物不良反应回顾性分析[J].医学理论与实践,2007,20(5):561-562.

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