高山被孢霉△6一脂肪酸脱氢酶基因在红冬孢酵母中的表达

李凌彦 胡彬彬 赵吉然 魏云林 林连兵 季秀玲 张琦

摘要：以绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）作为报告基因，将质粒pRH2304转化红冬孢酵母YM25235进行表达分析，荧光显微观察结果表明GFP在YM25235获得表达，建立了红冬孢酵母YM25235遗传转化方法 在此基础上，以高山被孢霉△6一脂肪酸脱氢酶基因取代pRH2304中的GFP基因，构建重组质粒pRH2304MAD6，将其转化红冬孢酵母YM25235进行表达分析。PCR结果表明，高山被孢霉△6一脂肪酸脱氢酶基因已经整合到YM25235基因组中，进一步的脂肪酸气相色谱分析结果表明，该基因编码产物催化n-6途径中的亚油酸转化成γ-亚麻酸，占细胞总脂肪酸的4.35%，但没有检测到催化n-3途径中的α-亚麻酸转化成十八碳四烯酸。

关键词：红冬孢酵母；高山被孢霉；△6一脂肪酸脱氢酶基因；γ一亚麻酸；表达

中图分类号：Q786

文献标识码：A

文章编号：1007-7847（2014）04-0304-06

多不饱和脂肪酸（polyunsaturdted fatty acids，PUFAs）是指含有两个或两个以上双键、碳原子数为18～22的直链脂肪酸，除了作为结构成分和信号分子对维持细胞膜正常功能和一些基本的细胞过程具有重要的调节作用外，PUFAs在人体内合成变化会导致多种疾病，比如心血管疾病、肥胖、非胰岛素依赖性糖尿病、高血压、神经性疾病和癌症等。PUFAs按照脂肪链甲基端引入的最后一个双键位置分为n-3和n-6两大类，亚油酸LA（linoleic acid C18：2，n一6）和α-亚麻酸ALA（α-Linolenic acid， 18：3 n-3）是n-6和n-3 PUFAs合成的前体，两者在不同脂肪酸脱氢酶（Desaturase）和延长酶（Elongase）的交替催化下分别转化成γ-亚麻酸GLA（γ一Linolenic acid， C18：3 n-6）、花生四烯酸AA （Arachidonic acid， C20：4 n-6）、EPA（Eicosatetraenoic acid， C20：4 n一3）和DHA （docosa-hexaenoic acid， C22：6 n-3）等多种PUFAS。同一种脱氢酶或者延长酶都可利用n-3和n-6途径中的脂肪酸作为底物进行催化，但是由于酶的底物偏好性特点会导致一条途径的脂肪酸转化增强，而另一条途径的脂肪酸转化减弱。……