创伤失血性休克大鼠肠系膜淋巴液对血管内皮细胞程序性坏死的影响

王林林，王 兵，于金宝，张立亚，王玉亮，崔尧丽，王勇强

(1天津医科大学一中心临床学院，天津300070;2天津市第一中心医院重症医学科天津市急救医学研究所;3卫生部危重病急救医学重点实验室)

自上世纪80年代提出肠源性学说［1］以来，多器官功能障碍综合征(MODS)的发病机制得到了进一步解释，肠系膜淋巴液导致急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)的机制也得到进一步验证［2］。实验表明，创伤失血性休克(THS)肠系膜淋巴液能够导致血管内皮细胞凋亡和坏死［3］。近年来，研究证实在有些情况下细胞坏死也是由基因控制的、有序的过程［4］，这个过程能被 Necrostatin-1(Nec-1)特异性阻断［5］。Nec-1是细胞程序性坏死的特异性阻滞剂，它能够特异性结合细胞程序性坏死传导通路中的关键酶。2013年3～7月，我们观察了THS肠系膜淋巴液能否导致血管内皮细胞程序性坏死，以及能否被Nec-1阻断。

1 材料与方法

1.1 材料 清洁级健康成年雄性SD大鼠12只，体质量280～320 g，购于中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，许可证号:SCXK-(军)20070004;饲养于采用明暗各12 h、25℃恒温的隔离系统动物房内，适应期至少7 d，实验前禁食12 h。多导生理记录仪(美国AD公司)，酶标仪(美国伯乐公司)，垂直电泳仪(美国伯乐公司)，凝胶成像分析仪(美国伯乐公司)，移液枪(德国艾本德公司);MTT细胞活性检验试剂盒，人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，二甲基亚砜(DMSO);抗体:鼠抗受体交互体用蛋白(RIP)抗体(1∶2 000，BD 公司)，RIP3(H-43):SC-135170(1∶200，Santa Cruz公司)，Anti-GAPDH单克隆抗体(1∶2 500，EarthOx公司)，羊抗兔 IgG(1∶1 000，Immuno Reagents公司)，羊抗鼠IgG(1∶1 000，Immuno Reagents公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物分组与模型制备 将大鼠随机分为手术(T/HS)组与假手术(T/SS)组，每组6只。……