全反式维甲酸对卵巢癌SKOV3细胞增殖、分化的影响

张海娟，杨玉秀

(石家庄市第四医院，石家庄050017)

自1971年Friend等发现二甲基亚砜可诱导小鼠红白血病细胞分化为成熟红细胞而产生血红蛋白以来，诱导分化作为一种治疗恶性肿瘤的有效方法引起了人们的重视。维甲酸类化合物是常用的诱导分化剂，对多种恶性肿瘤具有诱导分化、抑制增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用［1］。全反式维甲酸(ATRA)是维生素A的天然衍生物及生物活性形式，能诱导多种肿瘤细胞分化或抑制肿瘤细胞增殖［2］。为探讨ATRA对卵巢癌SKOV3细胞的抑制增殖和诱导分化作用，2009年1～12月，我们进行了相关研究。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 卵巢癌SKOV3细胞株购自北京大学人民医院。RPMI-1640培养基购自GIBCO BRL公司;MTT购自Singma公司。鼠抗人分化相关基因1(NDRG1)单克隆抗体购自DBS公司;SP试剂盒和DAB显色剂购自北京中山生物公司。ATRA购自Sigma公司;酶标仪购自Absystems Dragon公司;流式细胞分析仪购自BD Facscalibur公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 以1×10－6mol/L的ATRA处理人卵巢癌 SKOV3细胞 1、2、3、5 d为实验组，不加ATRA处理细胞为对照组。将SKOV3细胞置于RPMI-1640培养基中，加入10%的新生牛血清、100 U/mL青霉素和0.1 mg/mL链霉素。细胞培养用50 mL培养瓶，在5%CO2、37℃饱和湿度的温箱中培养，细胞生长达汇合状态时，用0.04%EDTA消化后传代。

1.2.2 细胞增殖抑制率测定 采用MTT比色法。取对数生长期细胞，消化后加培养液吹打均匀，以1×105/mL细胞密度接种于96孔培养板，每孔加入100 μL细胞悬液，24 h后加入ATRA储存液，并用RPMI-1640培养液调终浓度为1×10－6mol/L。实验组每组设6复孔，24 h更换培养液，分别将ATRA作用1、2、3、5 d后的细胞进行测定，向每孔培养液中加入5 mg/mL的MTT 20 μL，小心吸去上清，4 h后每孔加150 μL DMSO液终止反应，用酶标仪测490 nm波长的吸光度(A值)，计算细胞增殖抑制率。……