白芍总苷对葡萄膜炎模型大鼠的保护作用Δ

吴 伟，何梅凤，郭泽莉，黄祥坤，钟建文（中山大学中山眼科中心，广州 510060）

葡萄膜炎是眼科常见的致盲眼病之一，病因和致病机制复杂，主要与自身免疫有关，其治疗以糖皮质激素和环孢素、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、他克莫司等免疫抑制剂为主，但此类药物往往因毒副作用大而使有些患者不能耐受，给临床治疗带来极大的困难。因此，亟需开发新的安全有效药物治疗葡萄膜炎。白芍总苷是我国传统中药白芍根中提取的有效成分，广泛应用于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征、特发性关节炎、特发性血小板减少性紫癜、慢性荨麻疹等多种疾病的治疗[1-3]，在炎症免疫性疾病中发挥了重要作用。本研究通过内毒素（LPS）诱导的葡萄膜炎模型大鼠，初步探讨白芍总苷对葡萄膜炎模型大鼠的保护作用，以期为葡萄膜炎的临床治疗提供一种新的选择。

1 材料

1.1 仪器

Axioplan 2型荧光显微镜（德国Zeiss公司）；SL-D7/DC-3型裂隙灯数码图像处理系统（日本Topcon公司）。

1.2 内毒素与药品

伤寒杆菌（LPS，美国Sigma公司，批号:032 M4002 V）；白芍总苷胶囊（宁波立华制药有限公司，批号:120312，规格:0.3 g/粒）；醋酸泼尼松片（天津药业焦作有限公司，批号:12040411，规格:5mg/片）。

1.3 动物

SPF级SD大鼠32只，♀♂兼用，体质量200～220 g，由南方医科大学实验动物中心提供[实验动物使用许可证号:SCXK（粤）2011-0015]。

2 方法

2.1 复制模型

[4]方法，将LPS溶于生理盐水中，使之终质量浓度为2 g/L，分别在SD大鼠的双后足底部注射50μl以复制大鼠葡萄膜炎模型。

2.2 分组与给药

32只SD大鼠随机均分为4组，即正常对照（等容生理盐水）组、模型（等容生理盐水）组、白芍总苷（4.8 g/kg）组、醋酸泼尼松（0.05mg/kg）组。于复制模型前ig给药，白芍总苷每隔6h给药1次，共3次；醋酸泼尼松仅单次给药。

2.3 大鼠眼部临床表现观察

分别于注射LPS 6、12、18、24、36、48 h后，用裂隙灯显微镜观察大鼠眼部临床表现，参照文献[5]临床评分方法:虹膜充血，0～2分；前房内渗出，0～2分；前房积脓，0～2分；瞳孔缩小，0～2分；总分为8分。

2.4 病理学检查

于注射LPS 18、24、36、48 h后各组随机处死2只大鼠，取眼球作病理检查。盐酸氯胺酮（0.3ml）和盐酸氯丙嗪（0.3ml）混合后ip大鼠进行麻醉。沿胸骨两侧剪开胸腔，暴露心脏，心尖部注射0.3ml肝素钠注射液（1500u/ml），用4Ⅸ预冷的0.01 mol/L PBS缓慢灌注，直到肝脏变白，再用40ml/L多聚甲醛溶液灌注固定。小心摘取眼球置40ml/L多聚甲醛溶液中固定24h。作常规石蜡包埋切片，HE染色，荧光显微镜观察结果。

2.5 统计学方法

实验数据均采用SPSS13.0进行分析，数据以表示。组间单因素比较先用单因素分析其正态分布，后以LSD法进行统计，方差不齐时，各组间两两比较采用Tamhance’s T2检验。不同时间点测定同一数据采用重复测量方差分析法。P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 白芍总苷对模型大鼠眼部炎症的影响

正常对照组大鼠未见炎症发生。模型组大鼠注射LPS 6h开始出现瞳孔缩小，结膜充血，虹膜血管轻度扩张，并表现出畏光；12h时瞳孔进一步缩小，结膜、虹膜充血加重，瞳孔缘开始出现纤维素样渗出；18h时炎症进一步加重；24h时达炎症的高峰，大鼠瞳孔显著缩小，虹膜充血明显，前房纤维素样渗出明显增多，甚至前房积脓。白芍总苷组大鼠注射LPS 6h结膜轻度充血；12h时开始出现瞳孔缩小，虹膜轻度充血，并表现出畏光；18～24h时，瞳孔进一步缩小，虹膜充血明显，瞳孔区靠近虹膜缘处隐约见少量纤维素样渗出，但前房内未见白色积脓。注射LPS 36h后各组大鼠炎症开始减退。各时间点与模型组比较，白芍总苷组大鼠眼部炎症临床评分降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。大鼠眼部炎症临床评分见表1（正常对照组仅作参考，表中未列出）。

表1 大鼠眼部炎症临床评分（）Tab 1 The clinical score of ocular inflammation in rats（）

表1 大鼠眼部炎症临床评分（）Tab 1 The clinical score of ocular inflammation in rats（）

与模型组比较:＊P＜0.05vs.model group:＊P＜0.05

时间12h（n＝16）总评分3.12±0.722.00±0.37＊1.81±0.40＊6.5±0.823.69±0.70＊3.56±0.51＊6.67±0.894.08±0.67＊3.92±0.67＊炎症临床评分18h（n＝16）24h（n＝12）组别模型组白芍总苷组醋酸泼尼松组模型组白芍总苷组醋酸泼尼松组模型组白芍总苷组醋酸泼尼松组虹膜充血1.56±0.511.06±0.251.00±0.002.00±0.001.50±0.521.44±0.512.00±0.001.50±0.521.50±0.52前房内渗出0.38±0.500.00±0.000.00±0.001.63±0.500.81±0.400.69±0.491.67±0.491.00±0.430.92±0.51前房积脓0.00±0.000.00±0.000.00±0.001.06±0.570.00±0.000.00±0.001.08±0.510.00±0.000.00±0.00瞳孔缩小1.19±0.400.94±0.250.88±0.341.81±0.401.38±0.501.44±0.511.92±0.291.58±0.511.5±0.52

3.2 白芍总苷对模型大鼠眼部病理学的影响

正常对照组未见炎症发生。注射LPS 18h后模型组大鼠虹膜睫状体水肿明显，前后房、玻璃体内有炎症细胞浸润，前房内纤维素样渗出明显，视网膜水肿增厚，有炎症细胞浸润，炎症的高峰期持续至24h。白芍总苷组大鼠眼部炎症较模型组明显减轻，在炎症的高峰期虹膜睫状体水肿明显减轻，仅有少量的炎症细胞浸润，前房有少量的纤维素样渗出，视网膜的浸润细胞明显减少。注射LPS 36h时各组大鼠眼部炎症开始减退，虹膜睫状体肿胀、炎症细胞浸润、前房纤维素样渗出等炎症表现均较24h时明显减轻。48 h眼部炎症已基本减退。注射LPS 24h后大鼠眼前段和后段的病理学改变见图1、图2。

图1 注射LPS 24h后大鼠眼前段组织病理学改变A.正常对照组；B.模型组；C.白芍总苷组；D.醋酸泼尼松组Fig 1 Histopathological change in anterior segment of eye in rats 24h after injection of LPS for 24hoursA.normal control group；B.model group；C.TGP group；D.prednisone acetate group

图2 注射LPS 24h后大鼠眼后段组织病理学改变A.正常对照组；B.模型组；C.白芍总苷组；D.醋酸泼尼松组Fig 2 Histopathological change in posterior segment of eye in rats 24h after injection of LPSA.normal control group；B.model group；C.TGP group；D.prednisone acetate group

4 讨论

近年研究显示，白芍总苷可通过多种途径发挥抗炎和免疫调节作用。刘国玲等[6]的研究发现，白芍总苷对类风湿性关节炎模型大鼠炎症有抑制作用，其机制可能与下调NF-kB/p65蛋白的表达，降低类风湿性关节炎模型大鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-1 β的水平有关。刘朝东等[7]观察了白芍总苷对慢性非细菌性前列腺炎模型大鼠的作用，发现白芍总苷可能通过抑制CD3+T淋巴细胞等炎症细胞的浸润，降低IL-6等促炎症细胞因子的过高表达。谢长江等[8]研究显示，白芍总苷能降低IL-1、IL-6及TNF-α水平，减轻脓毒血症模型大鼠的炎症反应及肺组织的损伤程度，降低病死率。此外，白芍总苷能抑制胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖，下调β抑制蛋白-2的表达，并能降低血清促炎症细胞因子IL-1 β、TNF-α和前列腺素（PG）E2水平，从而对模型大鼠胶原诱导性关节炎产生抑制作用[9-12]；白芍总苷还能抑制脂多糖诱导的炎症反应及TNF-α、IL-6过度分泌[13-14]。由此可见，白芍总苷可以在多个环节影响自身免疫疾病的细胞免疫、体液免疫以及炎症过程，减轻自身免疫性炎症反应。在眼科临床，有学者应用白芍总苷治疗内因性葡萄膜炎发现，它能改善患者细胞与体液免疫异常状况，并有一定的治疗作用[15]。提示其对缓解葡萄膜炎的炎症反应可能起着一定的作用，具有潜在的应用价值。

本研究选用大鼠葡萄膜炎模型，以ig给药方式探讨了白芍总苷对葡萄膜炎的保护作用。结果发现，白芍总苷对模型大鼠的临床症状、疾病进程、病理进程均有不同程度减轻，其主要原因可能与白芍总苷的抗炎及免疫调节有关，但尚需进一步研究验证。同时，白芍总苷不良反应少，并且还有肝脏保护作用，有良好的耐受性[16-17]。因此，对于因自身免疫原因而反复发作，迁延不愈，需长期规范用药才能控制的葡萄膜炎，以及不宜应用强效免疫抑制剂或激素治疗的葡萄膜炎患者，白芍总苷将是一种较为理想的药物。

参考文献

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