2011年～2012年四川地区J亚型禽白血病分子流行病学调查

余松城，任 雅，牛 婷，夏 静，吴瑞婷，杨晓林，易 林，邹年莉，黄 勇*

(1.四川农业大学动物医学院，四川 雅安 625014；2.四川省雅安市天全县农业局，四川 雅安 625500)

禽白血病(Avian leukosis，AL)主要由反转录病毒科禽甲型反转录病毒属的AL病毒(ALV)及禽肉瘤病毒(RSV)等引起，以造成禽类造血组织中某些细胞成分过度增生的多种肿瘤性疾病为主[1]。自1998年以来，J亚群ALV(ALV-J)的出现给养禽业造成了严重的损失[2]。

J亚群AL在我国已广泛存在，近几年该病的流行日趋严重，由于ALV-J具有广泛的宿主嗜性，目前我国黄羽鸡、麻鸡、白羽肉鸡、海兰褐等多个品系发生ALV-J的感染[3-4]。自2011年初以来，四川地区疑似鸡J亚群AL病例频发，各鸡种均有发病，鸡群ALV的感染率较高，病死率也相对较高。为了解近年来ALV-J的流行情况和病毒分子特征，我们从多个鸡场采集样品并进行检测，初步分析了ALV-Jgp85基因的分子特性。

1 材料和方法

1.1 病料样品来源 2011年10月至2012年10月分别在四川部分地区的8个鸡场采集疑似AL鸡的700份血液样本和84份组织样本，采样鸡品种主要为三黄鸡、白羽鸡、藏鸡、绿壳蛋鸡、草科鸡。

1.2 主要试剂 DNA Marker购自天根生化科技(北京)有限公司；pMD19-T载体及TaqDNA聚合酶购自TaKaRa公司；大肠杆菌DH5α由本实验室保存。

1.3 引物设计与合成 参照文献[5]方法设计用于检测ALV-J的引物，JF：5'-GGATGAGGTGACTAA GAAAG-3'，JR：5'-CGAACCAAAGGTAACACACG-3'，其扩增产物预期为545 bp。根据GenBank中登录的HPRS103(Z46390.1)的基因序列设计扩增gp85基因引物，GP85-F：5'-GTGCGTGGTTATTATTTCCG-3'，GP85-R： 5'-CGGGCTGTCACACTCCATAG-3'，其扩增产物预期为924 bp。引物均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

1.4 样品的PCR检测 将采集的样品经蛋白酶K消化，酚/氯仿抽提方法提取样品中ALV-J的前病毒基因组DNA，以其为模板采用检测引物JF/JR进行PCR扩增。……