人体淋巴母细胞建株方法的改进研究

熊乐琴 马昌杯 李善妮 帅云飞

随着人类社会的发展, 遗传多样性的保存显得尤为重要,对于全球性生物多样性研究具有重大意义。人类突变细胞是研究人类生物学特征的重要资源, 也是在细胞水平上开展遗传病研究的宝贵材料。在传统的淋巴母细胞建株方法的基础上, 作者于2012年1月～2013年12月对此进行了改进, 效果明显, 建株时间在18 d左右, 且成功率保持在95%以上,有效提高了淋巴母细胞建株的成功率, 缩短了建株时间, 操作简便, 为人类突变细胞的收集、保存以及遗传资源的保存创造了有利条件, 值得推广应用。

1 材料与方法

1.1 材料 1640培养基(pH7.2±0.1)、谷氨酰胺(glutamine)、血清、环孢霉素(Ciclosporin)、淋巴细胞分离液(lymphocyte isolation)、EB病毒。

1.2 EB病毒的制备 方法一：选取B95-8细胞, 用前1天内进行换液, 并反复冻融2～3次, 将收集的上清液进行过滤,4～5℃保存。方法二：运用传统方法对EB病毒进行制备,-70℃保存。

1.3 人类淋巴母细胞建株 取外周血4～5 ml, 与2～3 ml 1640培养基(pH 7.2±0.1)在离心管中进行混合, 并将混合液注入置含有2～3 ml淋巴细胞分离液的离心管中, 待静置1 min后,离心后分离淋巴细胞, 洗涤3次, 注入培养液(1 mmol/L谷氨酰胺, 25%血清) 6 ml, 随机平均分为6份, 共3组。①、②组加入0.5 ml血清以及方法一制备的EB病毒1 ml, ③组加入传统方法制备的EB病毒1 ml；每份加入适量环孢霉素, 轻轻混匀。①组、②组采取36℃开放式培养, 2 d后半量换液,并加入适量环孢霉素和EB病毒, 保持环孢霉素的浓度, 此后每隔3 d进行换液；7 d后对①组标本行活细胞分离, 待细胞数达到目标范围后进行细胞核型分析以及冻存。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行数据的统计学分析, 成功率比较采用χ2检验。……