抑制miR-886-5p表达对SiHa细胞侵袭的影响

王建新 马翠花

宫颈癌为妇科常见恶性肿瘤之一，其发病率近年来呈上升趋势，严重威胁女性的生命健康，受到全世界的广泛关注［1］。虽然已知宫颈癌的发病与人乳头瘤病毒(HPV)感染有关，但是肿瘤的形成机制仍未完全阐明。近些年一类新的非蛋白编码microRNAs(miRNAs)的出现，为肿瘤研究提供了新的思路。miRNAs是一类长约21～24个核苷酸的内源性非编码小分子RNA，在调节细胞增值，凋亡以及肿瘤的发生过程中起了很重要的作用［2，3］。有研究发现 miR-886-5p在宫颈癌的含量明显高于癌周及癌旁组织［4］。本实验通过下调人宫颈癌SiHa细胞miR-886-5p的表达，采用Transwell侵袭实验研究miR-886-5p在SiHa细胞中的生物学行为，为宫颈癌的诊治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料 宫颈癌SiHa细胞购自协和医科大学基础医学研究所。带有GFP标签的抑制miR-886-5p表达及对照质粒(miR-886-5p inhibitors/NC)均来自中国吉玛公司。主要试剂:DMEM培养基购自GIBCO公司，三氯甲烷、异丙醇和无水乙醇均购自北京化学试剂公司，TRIzol试剂，MML-V试剂盒和 LipofectamineTM2000均为美国 Invitrogen公司产品，质粒小量提取试剂盒购自博大泰克公司，SYBR Premix Ex Taq试剂购自TakaRa公司，PCR扩增引物的合成与 DNA测序均由上海生工公司完成。Transwell®及培养皿均购自Corning公司，Matrigel购自BD公司。

1.2 细胞培养与转染 SiHa细胞培养于含10% 胎牛血清(FBS)的DMEM培养基内，每3天换液1次，0.25% 胰酶消化传代，倒置显微镜下观察。在转染前1天用12孔板接种细胞，每孔5×105个细胞，培养过夜，待转染带有GFP标签的miR-886-5p inhibitor/NC质粒，每组3个复孔。细胞长满60%培养孔底时，用不含血清的DMEM各500 μl分别稀释2 μg待转染质粒和5 μl LiPofectamine 2000 转染试剂，室温放置5 min后，将两者混合作用20 min形成DNA-脂质体复合物。……