2011至2013年唐山市丰南区手足口病病原学监测结果分析

刘伟 姚向晖

手足口病(hand－foot-mouth-disease，HFMD)近几年有全球性流行的趋势，由于该病无法在一次感染后获得终生免疫且引发手足口病的肠道病毒有20多种。所以对于重症病例、聚集性病例、疑难病例实验室检测显得尤为重要。目前国内手足口病的病原体以柯萨奇病毒A组16型(CA16)和肠道病毒71型(EV71)为主［1］。为了解丰南地区手足口病病原体的分布特征，为手足口病的诊断和预防措施提供科学依据，现将2011至2013年唐山市丰南区HFMD的病原学监测结果进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2011至2013年唐山市丰南区医疗机构就诊的手足口病患儿的咽拭子标本，标本采用冷链运送至实验中心立刻检测或－70℃冻存待检。

1.2 主要仪器与试剂 DA7600PCR扩增仪DYY-6C型水平电泳仪GAS7100B型凝胶成像仪，人肠道病毒(HEV)RNA、EV71RNA、CA16RNA检测试剂盒由广州中山大学达安基因股份有限公司提供，引物由上海之江生物科技有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 核酸提取严格按照说明书操作，运用Trizol试剂裂解沉淀法提取肠道病毒RNA。

1.3.2 Real Time RT-P CR扩增操作均按照试剂盒说明书进行，反应体系25 μl，每次实验均设置阴性对照和阳性对照扩增程序:40℃25 min，1个循环;94℃3 min，1个循环;93℃ 15 s～55℃ 45 s，共40个循环;72℃ 7 min;4℃保存。

1.3.3 检测扩增产物用0.5×TBE缓冲液配制2.5%琼脂糖凝胶，加样后110 V电压持续电泳50 min，用凝胶成像仪对PCR产物条带进行分析，以DL2000marker作为参照标准在紫外灯下观察特异性核酸条带，有目的片段条带出现即判为阳性。

1.4 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计量资料以表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2011至2013年丰南地区手足口流行情况 丰南地区的手足口病疫情已开始实施网络直报，数据显示，2011年报告发病强度较高，病例数达1714 例，2012和2013年处于较低发态势，分别为377和399例。……