猪圆环病毒1型阴性PK-15细胞的单细胞克隆与鉴定

刘 宏王莉君

(1.新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830000；

2.新疆天康畜牧生物技术股份有限公司,新疆乌鲁木齐 830000)

猪圆环病毒1型阴性PK-15细胞的单细胞克隆与鉴定

刘 宏1王莉君2

(1.新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830000；

2.新疆天康畜牧生物技术股份有限公司,新疆乌鲁木齐 830000)

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）属圆环病毒科圆环病毒属，是目前为止已知的最小的动物病毒之一。根据致病性、抗原性和核酸序列的差异，可将PCV分为PCV-1及PCV-2两个型。PCV1为非致病性的病毒，由德国学者Tischer于1974年从多株连续传代的PK-15细胞中最先发现。PCV2为致病性的病毒，来源于制备PK-15细胞的猪肾组织。猪圆环病毒对外界的抵抗力较强，对氯仿不敏感，不凝集猪、牛、羊、鸡等动物和人的红细胞。研究表明，该病毒可在RK-15细胞上生长，但不引起细胞病变，可在细胞浆内发现较多包涵体，少数感染的细胞还可能内含有核内包涵体。PCV不能在原代胎猪肾细胞、恒河猴肾细胞、BHK-21细胞上生长。

调查表明，PK-15细胞在被ATCC收藏后不久即检测出PCV1，然而确切的污染来源目前尚未查清，很有可能最初的猪肾细胞PK-2a就存在PCV1，或是其他的细胞培养物污染导致。所以，国内细胞供给实验室的PK-15细胞均有不同程度的PCV1污染。虽然PCV1无致病性，但由于其的存在会与PCV2发生相互污染，影响PCV2的传代增殖，而且不利于PCV2疫苗研发及抗体检测。综上，有必要筛选出一株无PCV1污染的PK-15细胞。

本研究拟采用有限稀释法筛选单细胞进行克隆，并经PCR检测，逐步筛选出一株猪圆环病毒1型阴性的PK-15细胞，用于PCV2的分离与传代培养研究。……