检测鸡痘病毒抗体间接ELISA方法的建立

黄卓文

(广州市高级技工学校,广东广州 510420)

检测鸡痘病毒抗体间接ELISA方法的建立

黄卓文

(广州市高级技工学校,广东广州 510420)

应用鸡胚成纤维细胞(CEF)扩增鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)并提纯后作为抗原建立了具有较高特异性和灵敏性的间接ELISA方法。通过方阵滴定法来确定抗原最佳稀释倍数为1：1600,待检血清最佳稀释倍数为1∶100。并检测50份FPV免疫实验鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为84%(42/50)。

间接ELISA；鸡痘病毒；抗体

鸡痘是由FPV引起的鸡的一种接触性传染病。本病分布于世界各地，特别是大型鸡场中更易流行，可使鸡生长迟缓、消瘦、产蛋量下降。若并发其它传染病、寄生虫病和卫生条件、营养状况不良时，可引起大批死亡，尤其对雏鸡造成更严重的损失，使用疫苗进行免疫预防是控制本病的重要措施[1]。

检测鸡血清中鸡痘抗体，可以了解疫苗免疫状况和机体感染情况。另外，FPV被越来越多用做载体构建基因工程疫苗，用于动物的免疫预防，所以，通过抗体的检测还可以间接评价重组鸡痘病毒对试验动物的免疫状态。鸡痘病毒抗体的血清学检测方法主要有免疫扩散试验、被动血凝试验、中和试验、荧光抗体技术和ELISA等[1～3]。对于比较常用的免疫扩散试验，由于沉淀抗体仅能在感染后的较短时间内测出，所以采血时间不当会影响检测结果。然而ELISA具有特异、灵敏、稳定、快速等优点，被越来越多地用于鸡痘病毒抗体的检测[4]。

1 材料和方法

1.1 病毒和血清

FPV282E4株，鸡痘阳性血清为使用市场疫苗免疫SPF鸡制备，阴性血清为1日龄SPF鸡血清，待检血清日常检测样品，新城疫、禽流感阳性血清为使用市场新城疫疫苗、禽流感单价疫苗免疫SPF鸡制备。……