球松素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用*

杨 艳

(泰山医学院，山东 泰安 271000)

动脉粥样硬化疾病始发于动脉内膜损伤，而血管内皮功能紊乱也被认为是动脉粥样硬化的最早期表现[1]。蜂胶是蜜蜂生产的天然绿色物质，具有多种医疗保健作用。研究表明[2，3]，蜂胶水提取液及黄酮类化合物具有抗炎、抗病毒、提高机体免疫力等多种医疗保健作用，并具有保护血管内皮细胞，防治动脉粥样硬化的功能。球松素是蜂胶黄酮类化合物中含量较高的单体之一。本实验采用脂多糖(LPS)诱导活化体外培养的的人脐静脉内皮细胞，建立血管内皮细胞损伤模型，探讨球松素对损伤血管内皮细胞的保护作用。

1 材料与方法

1.1实验材料 新生儿脐带(出生1 h内)：由泰安市中心医院产科提供。

1.2药品与试剂 球松素 (≥99.0%TLC)、脂多糖(From Escherichia coli 055：B5)、MTT粉剂、DMSO(购自美国Sigma公司)，I型胶原酶、胰蛋白酶、DMEM/F12培养基、特级胎牛血清(FCS)(购自美国Gibco公司)，PBS、D-Hank’s缓冲液由实验室配制，抗人Ⅷ因子抗体一抗(购自中杉生物技术开发有限公司)，NO含量测定试剂盒(购自上海太阳生物技术有限公司)，SABC免疫组化试剂盒(购自武汉博士德生物工程有限公司)，细胞凋亡检测(TUNEL)试剂盒(购自武汉博士德生物工程有限公司)。

1.3仪器与设备 SW-CJ-2FD超净工作台(苏州净化设备有限公司)；TMQ.R-3250自动台式灭菌器(新华医疗器械股份有限公司)；SANYO MCO-15AC CO2培养箱(日本SANYO公司)；酶标仪(BIO-RAD产品)；IX51倒置式基础型显微镜及Image-ProPlus-Version 4.0 for windows?图像处理系统(日本OLYMPUS公司)；M-3100型原子吸收-分光光度计(美国PE公司)。

1.4实验方法

1.4.1人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定 根据Jaffe[4]的方法并加以改进。……