一种高质量天门冬基因组DNA提取方法

韦荣昌+韦树根（等）

摘要：针对天门冬[Asparagus cochinchinensis （Lour.） Merr.]成熟叶片富含多糖、多酚、蛋白质及其他次生代谢物质的特点，采用改良CTAB法对其基因组总DNA进行提取，并对DNA进行质量检测。结果表明，改良CTAB法可从天门冬成熟叶片中获得纯度高、完整性好的总DNA，其OD260 nm/OD280 nm为1.86，OD260 nm/OD230 nm为2.36，浓度为390 μg/mL，产率达11.7 μg/g，多糖、多酚和RNA杂质被去除干净，无降解现象，说明该方法提取的天门冬基因组总DNA质量较高。

关键词：天门冬[Asparagus cochinchinensis （Lour.） Merr.]；DNA提取；CTAB法

中图分类号：R282；Q7 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）07-1678-03

A Method for Extracting High Quality DNA from Mature Leaves

of Asparagus cochinchinensis （Lour.） Merr.

WEI Rong-chang1，2，WEI Shu-gen1，FU Jin-e1，KE Fang1，PAN Li-mei1，DONG Qing-song1，TANG Qi3

（1. Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants， Nanning 530023，China；

2. Institute of Medicinal Plant Development， Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College，Beijing 100193，China；3.Horticulture & Landscape College，Hunan Agricultural University，Changsha 410128，China）

Abstract：The mature leaves of Asparagus cochinchinensis （Lour.） Merr. are rich in polysaccharides， polyphenols， protein and other secondary metabolism compounds preventing DNA extraction. The genomic DNA of A. cochinchinensis （Lour.） Merr. was extracted by improved CTAB method and DNA quantity was checked. The results showed that the genomic DNA was pure and integral without polysaccharides， polyphenols， RNA and degradation. The value of OD260 nm/OD280 nm and OD260 nm/OD230 nm were 1.86 and 2.36， respectively. The concentration and yield of DNA was 390 μg/mL and 11.7 μg/g. It can be concluded that this method could be used for extracting DNA with high quality from A. cochinchinensis （Lour.） Merr.

Key words： Asparagus cochinchinensis （Lour.） Merr.； DNA extraction； CTAB method

天门冬[Asparagus cochinchinensis （Lour.） Merr.]为百合科（Liliaceae）天门冬属（Asparagus Linn.）多年生攀援草本植物，又名天冬，以干燥块根入药。性寒，味甘、苦，含有甾体皂苷、多糖、氨基酸等多种活性成分，具有养阴润燥、清肺生津等功效[1]。目前，国内外对天门冬的研究主要集中在形态特征与生境习性[2]、药材鉴别[3]、化学成分[4，5]、药理与功效[6]、栽培技术[7，8]等方面，对其分子水平上的研究刚起步[9，10]，试验材料也仅限于幼嫩叶片，而天门冬成熟叶片富含多糖、多酚、蛋白质和其他次生代谢物质，大大增加了DNA提取的难度。本研究对传统CTAB法进行改良，获得了一种得率高、稳定性好、实用性广的天门冬成熟叶片基因组DNA提取方法，为开展天门冬分子生物学研究奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

天门冬新鲜叶片采自广西药用植物园科研基地，经中国医学科学院药用植物研究所马小军研究员鉴定。对种质资源圃中保存的17份天门冬种质资源进行收集，分别为百色野生大天冬、龙胜野生小天冬、阳朔栽培天冬、恭城野生小天冬、恭城野生……