双波长分光光度法测定银杏叶中直链淀粉、支链淀粉含量

焦铭等

摘要：采用双波长分光光度法检测银杏叶中直链淀粉、支链淀粉含量。利用淀粉与碘反应的显色作用绘制淀粉紫外吸收曲线，选择直链淀粉检测波长为462、610 nm，支链淀粉检测波长为516、728 nm，根据标准样品的回归方程可得到直链淀粉、支链淀粉含量。双波长分光光度法检测银杏叶中直链淀粉、支链淀粉含量，操作简单，重复性高，可用于工业上批量检测。

关键词：双波长分光光度法；直链淀粉；支链淀粉；银杏叶

中图分类号： R284.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0275-02

收稿日期：2013-10-04

基金项目：湖北省教育厅科学研究计划（编号：B2013050、Q20122802）；湖北科技学院国家级大学生创新创业训练计划（编号：201210927025）。

作者简介：焦铭（1977—），男，湖北武汉人，博士，讲师，主要从事植物分子遗传学研究。E-mail：jiaoming@whu.edu.cn。

通信作者：黄俊潮，主要从事植物生物化学研究。E-mail：jchuang77@163.com。银杏（Ginkgo biloba L.）属于裸子植物，是银杏科银杏属唯一存在的物种，是我国珍贵的植物资源[1]。银杏的药用价值主要体现在银杏叶成分，银杏叶中淀粉含量是其自身营养物质，决定了其他成分的含量和比例[2]。测定银杏叶中淀粉含量，有助于了解银杏药用成分的构成比，提高药用价值。淀粉可分为直链淀粉、支链淀粉，支链淀粉含量越高，银杏叶品质越高。以往的淀粉测定方法只能得到总淀粉量，无法区分直链淀粉和支链淀粉。本研究利用双波长分光光度法，直接、准确测定了银杏叶中直链淀粉、支链淀粉含量，以期为工业上批量检测银杏淀粉含量提供依据。

1材料与方法

1.1材料

银杏叶取材于湖北省安陆市银杏国家公园植物研究所。

直链淀粉、支链淀粉标准样品（美国Sigma公司）；无水乙醇、碘化钾、氢氧化钾、乙醚、氯化钾、碘、石油醚、盐酸（均为市售分析纯）。

1.2仪器设备

1.3方法

1.3.1溶液制备直链淀粉、支链淀粉标准溶液配制：称取2种淀粉样品各0.1 g，转移至100 mL烧杯中，加入2 mol/L氢氧化钾溶液10 mL，溶解后移到容量瓶，加蒸馏水定容到100 mL，分别得到1 g/L直链淀粉、支链淀粉标准溶液。

碘溶液配制：按常规方法配制2 g/L碘试剂，储存于棕色瓶中待用。

1.3.2样品处理采用酸式提取法[3]提取银杏叶中的淀粉，提取条件：亚硫酸浓度0.19%，液固比7 mL ∶1 g，浸提时间16 h。提取淀粉的工艺流程为：称取10 g银杏叶，将银杏叶用蒸馏水反复清洗3次，剪去主脉、支脉，在粉碎机中将银杏叶样品磨成粉末，加入亚硫酸溶液进行匀浆，用研磨器将匀浆液研磨呈糊状，用325目筛过筛，5 000 r/min离心10 min，弃上清，沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚反复洗涤，直至上清液变成无色。40 ℃干燥，研磨后用60目过筛，将银杏叶粉末用纱布包裹并保存待用。

1.3.3双波长直链淀粉标准曲线分别吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL直链淀粉标准溶液，放入不同的 50 mL 容量瓶。向每个容量瓶中加入30 mL蒸馏水，用 0.1 mol/L 盐酸调节pH值至3，加入0.5 mL碘试剂，用蒸馏水定容至50 mL。静置15 min，在λ1、λ2波长下分别测定吸光度（Dλ1、Dλ2），即得ΔD直=Dλ1-Dλ2。以ΔD直为纵坐标，直链淀粉浓度为横坐标，绘制双波长直链淀粉标准曲线。

1.3.4双波长支链淀粉标准曲线分别吸取1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mL支链淀粉标准溶液，其他流程同上。

1.3.5直链淀粉、支链淀粉含量测定称取0.1 g处理过的淀粉样品，加入0.5 mol/L氢氧化钾溶液10 mL，溶解后转入100 mL容量瓶，用蒸馏水定容。取样品液2.5 mL，调节pH值为3，加入碘试剂，定容静置。分别测定波长为λ1、λ2、λ3、λ4下的吸收值Dλ1、Dλ2、Dλ3、Dλ4，得到ΔD直、ΔD支。分别在直链淀粉、支链淀粉标准曲线中查询，可计算出样品中直链淀粉、支链淀粉含量。

2结果与分析

2.1淀粉检测双波长的选择

根据双波长分光光度法测定原理[4]，采用作图法选定参比波长、测定波长（图1）。用UV-2550紫外-可见分光光度计对淀粉溶液进行扫描可得到淀粉吸收光谱，根据作图法原理和扫描图谱，直链淀粉、支链淀粉最大吸收波长分别为610、516 nm，确定直链淀粉测定双波长为462、610 nm，支链淀粉测定双波长为516、728 nm。

2.2直链淀粉、支链淀粉的标准曲线

2.3双波长分光光度法精密度检验

3结论

银杏叶中淀粉含量是衡量其果实营养成分的主要指标之一，采用双波长分光光度法测定银杏叶中淀粉含量，可以一次性获得直链淀粉、支链淀粉、总淀粉含量，节省时间，适宜工业化推广。与传统蒽酮法相比，双波长法检测结果偏低，这可能是由于蒽酮法无法排除样品中天然糖分对测定结果的干扰，使结果偏高。

参考文献：

[1]张晓莉，孙英春. 银杏叶制剂临床应用的研究进展[J]. 中国社区医师：医学专业，2012，14（21）：12-13.

[2]黄其春，张桂招，林梅香，等. 银杏叶提取物及其含药血清对仔猪肠道菌的体外抑菌作用[J]. 江苏农业科学，2012，40（10）：185-187.

[3]何云，张海棠，刘长忠，等. 银杏叶及其提取物在家禽日粮中的应用研究进展[J]. 江苏农业科学，2009（3）：277-278.

[4]厦门大学化学系分析化学教研室. 双波长分光光度法原理简介[J]. 分析化学，1978，6（3）：224-231.endprint

摘要：采用双波长分光光度法检测银杏叶中直链淀粉、支链淀粉含量。利用淀粉与碘反应的显色作用绘制淀粉紫外吸收曲线，选择直链淀粉检测波长为462、610 nm，支链淀粉检测波长为516、728 nm，根据标准样品的回归方程可得到直链淀粉、支链淀粉含量。双波长分光光度法检测银杏叶中直链淀粉、支链淀粉含量，操作简单，重复性高，可用于工业上批量检测。

关键词：双波长分光光度法；直链淀粉；支链淀粉；银杏叶

中图分类号： R284.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0275-02

收稿日期：2013-10-04

基金项目：湖北省教育厅科学研究计划（编号：B2013050、Q20122802）；湖北科技学院国家级大学生创新创业训练计划（编号：201210927025）。

作者简介：焦铭（1977—），男，湖北武汉人，博士，讲师，主要从事植物分子遗传学研究。E-mail：jiaoming@whu.edu.cn。

通信作者：黄俊潮，主要从事植物生物化学研究。E-mail：jchuang77@163.com。银杏（Ginkgo biloba L.）属于裸子植物，是银杏科银杏属唯一存在的物种，是我国珍贵的植物资源[1]。银杏的药用价值主要体现在银杏叶成分，银杏叶中淀粉含量是其自身营养物质，决定了其他成分的含量和比例[2]。测定银杏叶中淀粉含量，有助于了解银杏药用成分的构成比，提高药用价值。淀粉可分为直链淀粉、支链淀粉，支链淀粉含量越高，银杏叶品质越高。以往的淀粉测定方法只能得到总淀粉量，无法区分直链淀粉和支链淀粉。本研究利用双波长分光光度法，直接、准确测定了银杏叶中直链淀粉、支链淀粉含量，以期为工业上批量检测银杏淀粉含量提供依据。

1材料与方法

1.1材料

银杏叶取材于湖北省安陆市银杏国家公园植物研究所。

直链淀粉、支链淀粉标准样品（美国Sigma公司）；无水乙醇、碘化钾、氢氧化钾、乙醚、氯化钾、碘、石油醚、盐酸（均为市售分析纯）。

1.2仪器设备

1.3方法

1.3.1溶液制备直链淀粉、支链淀粉标准溶液配制：称取2种淀粉样品各0.1 g，转移至100 mL烧杯中，加入2 mol/L氢氧化钾溶液10 mL，溶解后移到容量瓶，加蒸馏水定容到100 mL，分别得到1 g/L直链淀粉、支链淀粉标准溶液。

碘溶液配制：按常规方法配制2 g/L碘试剂，储存于棕色瓶中待用。

1.3.2样品处理采用酸式提取法[3]提取银杏叶中的淀粉，提取条件：亚硫酸浓度0.19%，液固比7 mL ∶1 g，浸提时间16 h。提取淀粉的工艺流程为：称取10 g银杏叶，将银杏叶用蒸馏水反复清洗3次，剪去主脉、支脉，在粉碎机中将银杏叶样品磨成粉末，加入亚硫酸溶液进行匀浆，用研磨器将匀浆液研磨呈糊状，用325目筛过筛，5 000 r/min离心10 min，弃上清，沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚反复洗涤，直至上清液变成无色。40 ℃干燥，研磨后用60目过筛，将银杏叶粉末用纱布包裹并保存待用。

1.3.3双波长直链淀粉标准曲线分别吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL直链淀粉标准溶液，放入不同的 50 mL 容量瓶。向每个容量瓶中加入30 mL蒸馏水，用 0.1 mol/L 盐酸调节pH值至3，加入0.5 mL碘试剂，用蒸馏水定容至50 mL。静置15 min，在λ1、λ2波长下分别测定吸光度（Dλ1、Dλ2），即得ΔD直=Dλ1-Dλ2。以ΔD直为纵坐标，直链淀粉浓度为横坐标，绘制双波长直链淀粉标准曲线。

1.3.4双波长支链淀粉标准曲线分别吸取1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mL支链淀粉标准溶液，其他流程同上。

1.3.5直链淀粉、支链淀粉含量测定称取0.1 g处理过的淀粉样品，加入0.5 mol/L氢氧化钾溶液10 mL，溶解后转入100 mL容量瓶，用蒸馏水定容。取样品液2.5 mL，调节pH值为3，加入碘试剂，定容静置。分别测定波长为λ1、λ2、λ3、λ4下的吸收值Dλ1、Dλ2、Dλ3、Dλ4，得到ΔD直、ΔD支。分别在直链淀粉、支链淀粉标准曲线中查询，可计算出样品中直链淀粉、支链淀粉含量。

2结果与分析

2.1淀粉检测双波长的选择

根据双波长分光光度法测定原理[4]，采用作图法选定参比波长、测定波长（图1）。用UV-2550紫外-可见分光光度计对淀粉溶液进行扫描可得到淀粉吸收光谱，根据作图法原理和扫描图谱，直链淀粉、支链淀粉最大吸收波长分别为610、516 nm，确定直链淀粉测定双波长为462、610 nm，支链淀粉测定双波长为516、728 nm。

2.2直链淀粉、支链淀粉的标准曲线

2.3双波长分光光度法精密度检验

3结论

银杏叶中淀粉含量是衡量其果实营养成分的主要指标之一，采用双波长分光光度法测定银杏叶中淀粉含量，可以一次性获得直链淀粉、支链淀粉、总淀粉含量，节省时间，适宜工业化推广。与传统蒽酮法相比，双波长法检测结果偏低，这可能是由于蒽酮法无法排除样品中天然糖分对测定结果的干扰，使结果偏高。

参考文献：

[1]张晓莉，孙英春. 银杏叶制剂临床应用的研究进展[J]. 中国社区医师：医学专业，2012，14（21）：12-13.

[2]黄其春，张桂招，林梅香，等. 银杏叶提取物及其含药血清对仔猪肠道菌的体外抑菌作用[J]. 江苏农业科学，2012，40（10）：185-187.

[3]何云，张海棠，刘长忠，等. 银杏叶及其提取物在家禽日粮中的应用研究进展[J]. 江苏农业科学，2009（3）：277-278.

[4]厦门大学化学系分析化学教研室. 双波长分光光度法原理简介[J]. 分析化学，1978，6（3）：224-231.endprint

摘要：采用双波长分光光度法检测银杏叶中直链淀粉、支链淀粉含量。利用淀粉与碘反应的显色作用绘制淀粉紫外吸收曲线，选择直链淀粉检测波长为462、610 nm，支链淀粉检测波长为516、728 nm，根据标准样品的回归方程可得到直链淀粉、支链淀粉含量。双波长分光光度法检测银杏叶中直链淀粉、支链淀粉含量，操作简单，重复性高，可用于工业上批量检测。

关键词：双波长分光光度法；直链淀粉；支链淀粉；银杏叶

中图分类号： R284.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0275-02

收稿日期：2013-10-04

基金项目：湖北省教育厅科学研究计划（编号：B2013050、Q20122802）；湖北科技学院国家级大学生创新创业训练计划（编号：201210927025）。

作者简介：焦铭（1977—），男，湖北武汉人，博士，讲师，主要从事植物分子遗传学研究。E-mail：jiaoming@whu.edu.cn。

通信作者：黄俊潮，主要从事植物生物化学研究。E-mail：jchuang77@163.com。银杏（Ginkgo biloba L.）属于裸子植物，是银杏科银杏属唯一存在的物种，是我国珍贵的植物资源[1]。银杏的药用价值主要体现在银杏叶成分，银杏叶中淀粉含量是其自身营养物质，决定了其他成分的含量和比例[2]。测定银杏叶中淀粉含量，有助于了解银杏药用成分的构成比，提高药用价值。淀粉可分为直链淀粉、支链淀粉，支链淀粉含量越高，银杏叶品质越高。以往的淀粉测定方法只能得到总淀粉量，无法区分直链淀粉和支链淀粉。本研究利用双波长分光光度法，直接、准确测定了银杏叶中直链淀粉、支链淀粉含量，以期为工业上批量检测银杏淀粉含量提供依据。

1材料与方法

1.1材料

银杏叶取材于湖北省安陆市银杏国家公园植物研究所。

直链淀粉、支链淀粉标准样品（美国Sigma公司）；无水乙醇、碘化钾、氢氧化钾、乙醚、氯化钾、碘、石油醚、盐酸（均为市售分析纯）。

1.2仪器设备

1.3方法

1.3.1溶液制备直链淀粉、支链淀粉标准溶液配制：称取2种淀粉样品各0.1 g，转移至100 mL烧杯中，加入2 mol/L氢氧化钾溶液10 mL，溶解后移到容量瓶，加蒸馏水定容到100 mL，分别得到1 g/L直链淀粉、支链淀粉标准溶液。

碘溶液配制：按常规方法配制2 g/L碘试剂，储存于棕色瓶中待用。

1.3.2样品处理采用酸式提取法[3]提取银杏叶中的淀粉，提取条件：亚硫酸浓度0.19%，液固比7 mL ∶1 g，浸提时间16 h。提取淀粉的工艺流程为：称取10 g银杏叶，将银杏叶用蒸馏水反复清洗3次，剪去主脉、支脉，在粉碎机中将银杏叶样品磨成粉末，加入亚硫酸溶液进行匀浆，用研磨器将匀浆液研磨呈糊状，用325目筛过筛，5 000 r/min离心10 min，弃上清，沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚反复洗涤，直至上清液变成无色。40 ℃干燥，研磨后用60目过筛，将银杏叶粉末用纱布包裹并保存待用。

1.3.3双波长直链淀粉标准曲线分别吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL直链淀粉标准溶液，放入不同的 50 mL 容量瓶。向每个容量瓶中加入30 mL蒸馏水，用 0.1 mol/L 盐酸调节pH值至3，加入0.5 mL碘试剂，用蒸馏水定容至50 mL。静置15 min，在λ1、λ2波长下分别测定吸光度（Dλ1、Dλ2），即得ΔD直=Dλ1-Dλ2。以ΔD直为纵坐标，直链淀粉浓度为横坐标，绘制双波长直链淀粉标准曲线。

1.3.4双波长支链淀粉标准曲线分别吸取1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mL支链淀粉标准溶液，其他流程同上。

1.3.5直链淀粉、支链淀粉含量测定称取0.1 g处理过的淀粉样品，加入0.5 mol/L氢氧化钾溶液10 mL，溶解后转入100 mL容量瓶，用蒸馏水定容。取样品液2.5 mL，调节pH值为3，加入碘试剂，定容静置。分别测定波长为λ1、λ2、λ3、λ4下的吸收值Dλ1、Dλ2、Dλ3、Dλ4，得到ΔD直、ΔD支。分别在直链淀粉、支链淀粉标准曲线中查询，可计算出样品中直链淀粉、支链淀粉含量。

2结果与分析

2.1淀粉检测双波长的选择

根据双波长分光光度法测定原理[4]，采用作图法选定参比波长、测定波长（图1）。用UV-2550紫外-可见分光光度计对淀粉溶液进行扫描可得到淀粉吸收光谱，根据作图法原理和扫描图谱，直链淀粉、支链淀粉最大吸收波长分别为610、516 nm，确定直链淀粉测定双波长为462、610 nm，支链淀粉测定双波长为516、728 nm。

2.2直链淀粉、支链淀粉的标准曲线

2.3双波长分光光度法精密度检验

3结论

银杏叶中淀粉含量是衡量其果实营养成分的主要指标之一，采用双波长分光光度法测定银杏叶中淀粉含量，可以一次性获得直链淀粉、支链淀粉、总淀粉含量，节省时间，适宜工业化推广。与传统蒽酮法相比，双波长法检测结果偏低，这可能是由于蒽酮法无法排除样品中天然糖分对测定结果的干扰，使结果偏高。

参考文献：

[1]张晓莉，孙英春. 银杏叶制剂临床应用的研究进展[J]. 中国社区医师：医学专业，2012，14（21）：12-13.

[2]黄其春，张桂招，林梅香，等. 银杏叶提取物及其含药血清对仔猪肠道菌的体外抑菌作用[J]. 江苏农业科学，2012，40（10）：185-187.

[3]何云，张海棠，刘长忠，等. 银杏叶及其提取物在家禽日粮中的应用研究进展[J]. 江苏农业科学，2009（3）：277-278.

[4]厦门大学化学系分析化学教研室. 双波长分光光度法原理简介[J]. 分析化学，1978，6（3）：224-231.endprint