新疆阿魏药材HPLC指纹图谱研究

李超颖， 卿德刚，张 娟， 倪 慧， 孙 宇， 张海英， 薛 洁

(1新疆大学生命科学与技术学院， 乌鲁木齐 830046； 2新疆维吾尔自治区中药民族药研究所， 乌鲁木齐 830002；3新疆医科大学附属中医医院， 乌鲁木齐 830002)

新疆阿魏(FerulasinkiangensisK.M.Shen)为伞形科(Umbelliferae)阿魏属植物，因具有葱蒜样臭味又名臭阿魏，是一类具有重要药用价值的珍稀植物资源[1]。阿魏多生长于内陆干旱荒漠地区，中国仅见于新疆西部地区。《中国药典》收载的阿魏药材为新疆阿魏或阜康阿魏的树脂，具有消积、化癥、散痞、杀虫等功能[2]。民间记载阿魏还用来治疗神经衰弱及肠胃不适、消化不良等疾病[3-6]。研究发现其具有植物雌激素活性成分[7-8]、抗癌物质[9]及抗HIV活性物质[10]。近年来，由于不合理采挖使得新疆阿魏的植物资源受到了毁灭性的打击，分布面积极度萎缩，现为国家二级保护植物。新疆阿魏资源的严重破坏导致了国内药材市场上伪品、混品较多，这种状况严重阻碍了新疆阿魏的开发和使用。为了更好地控制新疆阿魏药材质量的均匀性和稳定性，本研究收集了不同产地的新疆阿魏药材，采用高效液相色谱法，建立了新疆阿魏药材的指纹图谱分析方法，为新疆阿魏药材的鉴别和质量控制提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1仪器Waters2695型高效液相色谱仪，Mettler AE163电子天平，超纯水机(UPT-1-5)。

1.2材料阿魏药材均由新疆医科大学、新疆中药民族药研究所提供或由科研组在新疆伊犁拜什墩地区采集(表1)，经新疆中药民族药研究所贾晓光研究员鉴定均为伞形科阿魏属植物新疆阿魏(FerulasinkiangensisK.M.Shen)。法尼斯淝醇C(Farnesiferol C)对照品(沈阳药科大学提供，纯度≥95%，批号：54990-68-0)，液相用乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

表1 不同批次的新疆阿魏药材

2 方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Waters XTerra RP18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈为流动相A，以0.01%磷酸水为流动相B，梯度洗脱：0～25 min：(40%A)，25～45 min(50%A)，45～70 min(45%A)；体积流量：1.0 mL/min；检测波长:323 nm，柱温：30℃；进样量：10 μL 。

2.2溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取法尼斯淝醇C对照品1.56 mg，加甲醇溶解制成62.4 μg/mL的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取阿魏药材约0.2 g，精密称定，置于50 mL具塞锥形瓶中，加入25 mL甲醇，精密称定质量，超声提取30 min，取出，待冷却后，用甲醇补充减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45 μm滤膜，作为供试品溶液。分别精密吸取对照溶液及供试品溶液各10 μL,注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行检测，记录70 min的色谱图。

2.3方法学考察

2.3.1 提取方法的考察 本实验在进行方法学考察时比较了回流提取法、超声提取法2种不同的提取方法。经比较，2种提取方法所得色谱峰一致，超声提取法效率较高。实验还对不同提取溶剂、不同提取时间、不同提取次数进行了比较实验，实验结果表明，甲醇超声提取30 min可基本提取完全。

2.3.2 色谱条件优化 在色谱条件优化过程中，对甲醇-水、乙腈-水、甲醇-酸水溶液、乙腈-酸水溶液等不同体系进行比较，结果显示，乙腈-0.01%磷酸溶液系统要比其他系统分离度高，峰形对称性好，基线稳定；采用PDA检测器对检测波长进行了考察，记录并比较不同波长的色谱图，结果在323 nm检测波长下，阿魏色谱峰较多，基线平稳，信息丰富，故采用323 nm为检测波长。

2.3.3 主要共有峰的选择 本方法在检测指认主要色谱峰时，指认出了保留时间为4.459 min的阿魏酸、47.177 min的法尼斯淝醇B和55.718 min法尼斯淝醇C，但阿魏酸占总峰面积的比例相对较小，同时又存在于很多植物中，不具备良好的代表性；法尼斯淝醇B受到杂峰干扰，基线不平，最终选择了特征性强且可作为阿魏属植物中特征化学成分的法尼斯淝醇C作为主要共有峰。

2.3.4 精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样5次，记录色谱峰，计算各共有峰相对保留时间及相对峰面积的RSD均<3%，保留时间和峰面积基本无明显变化，结果表明仪器精密度良好。

2.3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24、48 h检测，记录色谱峰，计算各共有峰相对保留时间及相对峰面积的RSD均<3%，结果表明供试品在48 h内稳定。

2.3.6 重复性试验 取同一批次阿魏药材分别提取制备6份供试品，进行检测，记录色谱峰，计算各共有峰相对保留时间及相对峰面积的RSD均<3%，结果表明实验重复性良好。

2.4样品的测定分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下的色谱条件进行检测，记录70 min的色谱图。检测指认，结果10批新疆阿魏药材的指纹图谱，与参照物法尼斯淝醇C的色谱峰相对应的位置上有一主要色谱峰，其占总峰面积的百分比约为10%，保留时间约为55.718 min，该峰具有特征性，可作为主要共有峰(图1)。

A：法尼斯淝醇C B：样品图1 新疆阿魏药材及对照品HPLC色谱图

2.5指纹图谱分析同一实验条件下，测定所有供试品HPLC色谱图。根据不同供试品测定结果所给出的峰数、峰值(积分值)和峰位(相对保留时间)等相关参数进行分析、比较，制定优化的指纹图谱。通过对10批药材的指纹图谱进行考察，确定了18个共有峰。并对各峰的相对保留时间进行了计算(图2、表2)。

2.6阿魏药材指纹图谱相似度评价分别将收集到的10批新疆阿魏药材的色谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004年A版相似度软件，考察色谱峰相似度的一致性，进行相似度评价并统计了各批总峰数、总峰面积及共有峰与总峰面积的百分比。10批不同产地的新疆阿魏药材相似度平均值为0.980，符合《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求，所建立的新疆阿魏HPLC对照指纹图谱合格(表3)。

S：法尼斯淝醇C； S1～S10：10批样品图2 10批新疆阿魏药材指纹图谱

表2 10批新疆阿魏药材相对保留时间

表3 新疆阿魏药材相似度结果

3 结论

本实验对新疆阿魏药材建立了HPLC法指纹图谱，结果表明该方法稳定、可靠且简便，同时充分体现其综合化、宏观化等优于其他鉴别手段的优势。对10批药材进行指纹图谱特征成分比得到了较高的相似度，说明本方法可进行新疆阿魏药材质量控制和药材鉴定，为新疆阿魏药材的合理开发和应用提供了科学的理论依据。

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[6] 艾尼娃尔·艾克木，马亮英，马桂芝，等．HPLC法测定新疆阿魏抗溃疡提取物中阿魏酸的含量[J]．新疆医科大学学报，2009，32(10)：1436-1438．

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[10] Ping Z, Yo SS, Ta KS. Coumarins and bicoumarin from Ferula sumbul: anti-HIV activity and inhibition of cytokine release[J].Phytochemistry,2000,53:689-697.