RNA干扰技术沉默CDC25a基因对人肝癌细胞HepG2增殖的影响*

李 薇， 曹 骥， 周玲丽， 罗 旺， 杨 春， 骆成飘， 李 瑗， 苏建家

(广西壮族自治区肿瘤防治研究所，广西 南宁 530021)

RNA干扰技术沉默CDC25a基因对人肝癌细胞HepG2增殖的影响*

李 薇， 曹 骥△， 周玲丽， 罗 旺， 杨 春， 骆成飘， 李 瑗， 苏建家

(广西壮族自治区肿瘤防治研究所，广西 南宁 530021)

目的： 研究细胞分裂周期素25a(cell division cycle 25a，CDC25a)基因沉默后对于人肝癌细胞系HepG2增殖的影响。同时探讨该影响发生的可能作用机制。方法: 使用RNA干扰技术沉默人肝癌HepG2细胞的CDC25a基因，采用实时荧光定量PCR技术检测肝癌细胞中的CDC25a 及其作用基因cyclin E及CDK2的 mRNA表达水平，Western blotting检测CDC25a的蛋白表达水平，并采用MTT法、Giemsa染色法及流式细胞技术检测细胞的增殖情况。结果: CDC25a 的mRNA及蛋白表达水平在RNA沉默组细胞中的表达低于阴性对照组及正常对照组细胞(P<0.05)。Cyclin E及CDK2 的mRNA表达水平在沉默组低于阴性对照及正常对照组(P<0.05)。MTT法、Giemsa染色法结果显示沉默组细胞增殖能力低于阴性对照组及正常对照组细胞(P<0.05)，流式细胞技术结果显示沉默组细胞阻滞在G1期。 结论: LV-CDC25a-RNAi重组体感染HepG2细胞可以有效抑制CDC25a基因的表达，使人肝癌HepG2细胞增殖受到抑制，提示CDC25a基因可能是肝癌治疗的关键靶点。

基因，CDC25a； RNA干扰； 肝肿瘤

肿瘤发生是一个多因素、多基因、多步骤累积的过程，最明显区别于正常组织的是肿瘤细胞的生长具有自主性，即细胞增殖失控。有研究称几乎所有癌肿都表现出细胞周期紊乱或不规则，肝癌细胞作为消化系统常见肿瘤同样也有如此表现。细胞分裂周期素25a(cell division cycle 25a，CDC25a)属于细胞周期调控蛋白，其作用是活化细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase, CDK)/cyclin这个核心的复合体，因而该基因过度表达可使得细胞加速增殖，一旦平衡失调则会导致肿瘤的发生[1]。本课题组前期研究表明CDC25a蛋白在肝癌组织中呈高表达，并且肝癌患者分期、转移及复发与该蛋白表达呈正相关[2]。为进一步探讨CDC25a基因在肝癌发生及发展中的作用，本实验采用RNA干扰技术，通过构建靶向CDC25a基因的siRNA慢病毒载体(LV-CDC25a-RNAi)并转染人肝癌HepG2细胞，将CDC25a基因沉默后观察该基因对于细胞增殖的影响。……