阴离子型胰蛋白酶原基因G191R突变与胰腺炎发病的关系

李璐 丁辉 杨玉秀 韩双印 王春荣

胰腺炎(pancreatitis)是由于各种因素刺激导致胰腺分泌多种消化溶解酶，引起胰腺及周围组织“自身消化”的炎症病变。急性胰腺炎(AP)以胰腺局部炎症反应为主要特征[1]，慢性胰腺炎(CP)以胰腺实质发生慢性持续性炎性损害、纤维化及可能导致的胰管扩张、胰管结石或钙化等不可逆的形态改变为特征[2]。目前胰腺炎的分子生物学机制尚未明确，近年来的研究表明多种基因可能参与胰腺炎的发生[3]。国外已有学者证实，阴离子型胰蛋白酶原(anionic trypsinogen，PRSS2)基因的G191R突变可以降低CP的易感性，具有保护作用[4-5]，但国内尚无相关报道。本研究采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)及DNA测序等技术分析胰腺炎患者PRSS2基因G191R突变情况，探讨其与胰腺炎发生的关系。

材料与方法

一、材料

研究对象为2010年5月至2012年12月郑州大学人民医院明确诊断的155例AP、CP的住院患者，诊断均符合《中国急性胰腺炎诊治指南(草案)》[1]及《慢性胰腺炎诊治指南》[6]的标准，同时随机选择138例无亲缘关系的健康体检者作为正常对照。155例中AP 82例，其中男性46例，女性36例，年龄36～57岁，平均51岁；CP 73例，其中男性44例，女性29例，年龄38～60岁，平均50岁。本研究获得医院伦理委员会批准，所有患者及体检者均签署知情同意书。

二、方法

1．DNA抽提：采用NaI提取法抽提外周血白细胞基因组DNA。取空腹外周血100 μl (EDTA抗凝)，加入Ep管中，10 000 r/min离心3 min，弃上清；加双蒸水200 μl，混匀后加6 mol/L NaI 200 μl，漩涡振荡20 s，加氯仿-异戊醇(24∶1)400 μl，混匀20 s，12 000 r/min离心12 min，上清移入新Ep管，加入0.6倍体积异丙醇，混匀后室温……