MTT法检测金黄色萄萄球菌活菌数的研究

袁 琳，宁 丹，唐曦阳，李 晶

(中南民族大学 药学院，武汉 430074)

常见的细菌计数方法有比浊法、平板菌落计数法、血球板计数法等.比浊法和血球计数法均能较快的反应细菌数，但不能判断细菌的活性，易受培养基成分和代谢产物性质等的影响[1-3].平板菌落计数法操作复杂、重复性差、耗时长，不适于大批量实验.

MTT 法简单、快速、灵敏、稳定[4]，能准确的反应活细胞相对数目，目前已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验和肿瘤放射敏感性测定等[3, 5-7].MTT 比色法其检测原理为利用活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶将外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能，二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，以甲臜生成量与活细胞数量的关系来判断活细胞数量，OD 值越大，细胞活性越强[2,8,9].三羧酸循环中的琥珀酸脱氢酶在真核细胞中主要存在线粒体中，而在原核细胞中主要存在膜间，故MTT 法也可用来检测活细菌数量[10].

金黄色葡萄球菌(Staphyloccocusaureus)是重要的微生物研究材料，也是重要的食品污染指示菌.本实验以金黄色葡萄球菌为对象，探讨MTT 法应用于活细菌细胞数定量分析的可行性和检测条件.

1 材料与方法

1.1 材料和仪器

金黄色葡萄球菌(ACTT 25923)，由本室保存.胰蛋白胨、酵母提取物、琼脂粉、红霉素、MTT 等(Ameresco,美国).MH肉汤(青岛高科园海博生物技术有限公司)，氯化钠、二甲亚砜、无水乙醇为国产分析纯.

酶标仪(Multiskan ascent，Thermo Electron Corporation)，台式恒温振荡器(THZ-B，江苏太……