鱼腥藻铁调蛋白基因(alr0957)表达和Fe3+对藻生长的影响

陈思礼，龚凤娇，田 申

(中南民族大学 生命科学学院， 武汉 430074)

在鱼腥藻PCC7120中，铁元素的代谢途径由基因fur(furric uptake regulator)编码的铁吸收调节蛋白Fur调控.PCC7120基因组中有3种同源Fur基因,分别编码3种蛋白：FurA, FurB和FurC. FurC不与启动子结合，而是通过影响前两种蛋白与DNA靶位点结合的能力[1]，从转录水平调节与铁代谢相关基因的表达[2].Fur是典型的负调控因子.当亚铁离子富足时，为避免过量金属对细胞产生毒性，Fur与亚铁离子结合成聚合物，占据调控区域，阻遏该基因表达；当亚铁离子贫乏时，未结合到亚铁离子的Fur蛋白不能顺利结合到DNA调控序列，则相关的基因表达开启.此外，Fur还对异形胞分化，转录调节和氧化还原平衡等功能相关的基因有重叠调控作用[3]，还能抵御氧化胁迫和其它环境胁迫[4].

此次研究克隆出鱼腥藻PCC7120FurC基因(alr0957)，成功构建表达载体pET-fur,并在大肠杆菌BL21中表达出了带有组氨酸标签的融合蛋白，并通过设计不同Fe3+浓度梯度，探讨不同铁离子浓度对藻类生长的影响,为进一步该蛋白研究奠定了基础.

1 材料与方法

1.1 藻种和细菌菌株

鱼腥藻Anabaenasp.PCC 7120购于中科院水生生物研究所淡水藻种库(FACHB).大肠杆菌DH5α、BL21(DE3)均为本实验室保藏菌种.

1.2 载体质粒及其他试剂

pET-28a(+)载体为本实验室构建并保存，pMD18-T载体(Takara公司)，DNA聚合酶(Fermentas公司)，限制性内切酶、T4 DNA连接酶(Takara公司)，琼脂糖凝胶回收试剂盒、质粒DNA提取试剂盒(Axygene公司)， PCR引物合成和基因序列测定由南京金斯瑞生物科技有限公司完成.

1.3 基因组DNA提取

PCC7120基因组DNA提取对传统酚氯仿作了改进.离心收集……