Real-time PCR分析锰对甘草β-AS基因表达的影响

马生军，王文全，朱金芳，侯俊玲

(1.北京中医药大学中药学院,北京 100102；2.新疆农业大学食品科学与药学学院，乌鲁木齐 830052；3.中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193；4.中药材规范化生产教育部工程研究中心,北京 100102)

锰(Mn)是植物生长发育必需的微量元素之一，作为多种酶的活化剂和重要的氧化还原剂的研究还较薄弱，在已筛选的数量有限的编码酶基因中，部分生物学功能已得到确认[1]。近年来，利用T-DNA插入突变和酵母菌功能互补实验在植物中鉴定了多种转运蛋白基因，这些转运蛋白部分参与锰的跨膜运输[2]。进一步分析表明，转运蛋白在细胞水平上参与锰向细胞内的转运和向不同细胞器(叶绿体和线粒体等)的释放，以及活性离子在内膜区域(液泡、高尔基体和内质网等)的屏蔽作用，而在整个植株水平上参与植物对锰的吸收、长距离运输和在地上部的累积过程[3]。荧光实时定量PCR(Real-time quantitative PCR，Real-time PCR)技术是近年来发展起来的一种新的核酸微量技术，它实现了RT-PCR反应从定性到定量的飞跃。利用Real-time PCR手段分析不同浓度锰处理下甘草β-香树脂醇合成酶(β-amyrin synthase,β-AS)基因的表达丰度，对于明确该基因的表达受锰调控的影响具有重要意义。

甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)是中药中常用的大宗药材之一，具有补脾益气，祛痰止咳，调和诸药等功效，其主要次生代谢产物甘草酸是经过多个生物合成步骤才得以形成的，而每个步骤均受到酶的调控[4-5]。β-AS基因是甘草酸生物合成途径中的重要基因,与甘草酸生物合成具有密切关系[6]。……