五加皮体外抗甲型流感病毒的作用

周艳萌，陈博文，徐美霞，郎春媚

(1.遵义医学院 微生物学与免疫学实验室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 医学与科技学院2010级，贵州 遵义 563099；3.遵义医学院 医学与科技学院2008级，贵州 遵义 563099)

流行性感冒 (influenza,简称流感)是由流行性感冒病毒(influenza virus,简称流感病毒)引起的一种传染病,无论在发达国家还是发展中国家,每年的发病率都很高。在各型流感病毒中，宿主范围最广、对人类健康影响最大的是甲型流感病毒[1]。苗药五加皮,具有清热解毒,祛风除湿之功能[2]。本实验采用流感病毒H1N1感染狗肾细胞(MDCK)，采用先感染病毒后给药(治疗给药方式)、先给药后感染病毒(预防给药方式)、药物与病毒同时作用(直接灭活方式)的3种给药方式,观察五加皮对病毒的作用并计算药物的抗病毒有效率。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物与药物水浸液 五加皮购自贵州遵义市万胜堂药房。五加皮水浸液(0.1g/mL,每mL相当于生药0.5g)。其方法是称取五加皮粉末20g，加三蒸水200 mL浸泡15 d，滤纸过滤除去不溶物质，用无菌滤器除菌密封后，放入4 ℃冰箱保存备用。

1.1.2 病毒 甲型流感病毒H1N1，由遵义医学院微生物教研室提供。

1.1.3 鸡胚 9～11日龄鸡胚，由遵义医学院微生物教研室提供。

1.1.4 细胞株 MDCK，由遵义医学院微生物教研室提供。

1.1.5 试剂及试剂制备 胎牛血清购自上海蓝季科技发展有限公司，PBS、HEPES、DMEM为Solarbio公司，胰蛋白酶购于华美生物工程公司。

1.2 方法

1.2.1 H1N1流感病毒传代增殖 选择9～10日龄健康鸡胚,将0.2 mL H1N1甲型流感病毒液注入尿囊腔内。48 h后,无菌操作收集尿囊液。

1.2.2 血凝实验 倍比稀释测定血凝效价[3]。……