环孢菌素D衍生物PSC833逆转K562/DOX细胞的凋亡抗性及其机制

刘 玲， 王建刚， 李 艳， 王淑英

(河南科技大学医学院药学系，河南 洛阳 471003)

多药耐药性(multidrug resistance, MDR)是肿瘤化疗失败的重要原因，P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的高表达是肿瘤MDR的重要机制之一。P-gp为mdr1a基因的产物，由1 280个氨基酸组成，分子量170～180 kD，属于能量依赖性药物外排泵，可将抗癌药物由肿瘤细胞内外排至细胞外，使肿瘤细胞内药量减少，引起MDR的产生[1]。P-gp逆转剂都是P-gp底物，可竞争性或非竞争性抑制P-gp的外排功能，从而增加肿瘤细胞内药物蓄积，达到逆转肿瘤耐药的目的。PSC833是环孢菌素D的衍生物，具有非常强的P-gp逆转作用，同时没有环孢菌素A(cyclosporine A， CsA)的免疫抑制作用，是近年来发现的一种较好的P-gp抑制剂，也是目前唯一的进行临床研究的P-gp逆转剂。体外试验研究表明，PSC833对P-gp的抑制作用是CsA的10～20倍，对P-gp的结合力也比CsA高，因而不易被P-gp泵出到细胞外[2]。本实验拟观察环孢菌素D衍生物PSC833能否逆转人白血病细胞耐药株K562/DOX的抗凋亡作用，以及与凋亡调控蛋白表达的关系，深入探讨其逆转多药耐药的分子机制。

材 料 和 方 法

1 材料与细胞培养

PSC833由中国药科大学何玲教授提供；RPMI-1640培养基和胎牛血清(Gibco)；MTT (Sigma)；Annexin V/PI双染试剂盒(BD)；盐酸阿霉素(浙江海正药业股份有限公司)、硫酸长春新碱(上海华联制药有限公司)；活性氧(DCFH-DA)检测试剂盒和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)、Fluo-3/AM、细胞裂解液、BCA蛋白含量检测试剂盒、线粒体分离试剂盒(碧云天生物技术研究所)；细胞周期测定试剂盒、ECL检测试剂盒(南京凯基生物技术有限公司)；细胞色素 C(cytochrome C, Cyt C)、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、β-actin抗体和anti-rabbit IgG购于Bioworld。其余试剂均为市售分析纯。……