左卡尼汀抑制过氧化氢介导的NFATc3核转位*

戴红良， 黄 雷， 贾桂枝， 梁春光， 李 昕， 戚春玲

(辽宁医学院 1护理学院, 3生物化学与分子生物学教研室，辽宁 锦州 121001； 2锦州市食品药品检验所，辽宁 锦州 121000)

左卡尼汀是位于线粒体膜的机体内源性化合物，主要来源于肝肾合成以及体外的饮食摄入[1-2]。其基本作用是促进长链脂肪酸转运至线粒体进行β氧化，为机体供能[3]。除此之外，左卡尼汀还具有显著的抗氧化活性[4-5]。我们之前的研究发现，左卡尼汀可显著抑制过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞凋亡，其抗凋亡机制与抑制Ca2+/钙调神经磷酸酶(calcineurin, CaN)信号级联有关[5-6]。胞浆活化T细胞核因子3(nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 3, NFATc3)是CaN下游的重要转录因子。本研究拟通过分析左卡尼汀对H2O2刺激下心肌细胞内NFATc3表达及分布的变化，进一步探讨其抗氧化损伤的机制。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1药物与试剂 左卡尼汀、胰蛋白酶、DMEM低糖培养基T和Hoechst 33258染料均购于Sigma；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所；细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒及BCA蛋白浓度测定试剂盒购自碧云天生物技术研究所；NFATc3及β-actin I抗购于Santa Cruz；Lamin B I抗购于Pierce；辣根过氧化物酶(horseradish peroxide, HRP)标记的II抗购于Santa Cruz;FITC标记的II抗购自北京中杉金桥公司。

1.2动物 出生1～3dSprague-Dawley(SD)大鼠乳鼠，雌雄不拘，由辽宁医学院实验动物中心提供。动物合格证号为SCXK(辽) 2003-0007。

2 方法

2.1心肌细胞培养 取出生1～3 d SD大鼠乳鼠，开胸取出心脏，用D-Hanks液冲洗3次后剪成约1 mm×1 mm×1 mm大小的碎块，在37 ℃条件下，以0.8 g/L胰蛋白酶消化分离细胞。将消化完毕的细胞以差速贴壁法进行纯化后，置于含15%胎牛血清的DMEM培养液中，置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养。……