无水化处理在病理组织HE染色中的应用价值

武良美 张 雁 高凤婷

(江苏省南京市浦口区中心医院病理科 211800)

病理切片制片为病理诊断的基础工作，制片质量高低直接影响到诊断的准确与否，也反映了医院的治疗水平［1］。切片和染色为制片的主要内容，其中，HE染色为组织标本处理中最常用的染色方法，其制作简单，可得到染色稳定、色彩鲜艳的制片，但也存在一定的问题如使用过程中褪色等。此类问题的出现与苏木精与伊红染色液的pH值不够稳定有关［2－3］。对染色前的切片进行无水化处理可有效改善此类问题。本文现将无水化处理HE染色的主要内容介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂

结肠组织标本(临床科室送检样品);无水乙醇及95%乙醇(国药集团试剂厂，分析纯);苏木精及伊红Y(化学纯，上海善普化工科技有限公司);其他试剂为实验室常规试剂，均为分析纯。苏木精、伊红染色液，酸性饱和硫酸钾溶液，酸性移除溶液的配制参考文献方法［4］。

1.2 组织处理及染色

1.2.1 组织处理将送检结肠组织使用10%甲醛溶液固定，脱水、石蜡包埋，冷冻切片。切片厚度为4 μm，共80张切片。并随机分为实验组和对照组各40张。使用二甲苯洗去石蜡、无水乙醇－95%乙醇梯度水化后将切片置于蒸馏水中备用。

1.2.2 苏木精染色 将实验组切片从蒸馏水中取出，浸泡于酸性硫酸钾饱和溶液中，使充分浸泡。滴入苏木精染色液3 min。对照组切片自蒸馏水中取出后不经酸性硫酸钾饱和溶液浸泡直接苏木精染色液3 min。

1.2.3 伊红染色 实验组:从苏木精染液中取出，蒸馏水冲洗5 s后直接置于3%碳酸氢钠水溶液中，分别上下振动3次，约5 s;蒸馏水冲洗20 s后置于酸性乙醇中，分别上下振动3次，约5 s;采用伊红染色液染色5 s，蒸馏水冲洗5 s。……