UPLC法同时测定穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量*

★ 程帆 刘鹏 刘地发 刘艳红 杨小玲*

(江西青峰药业有限公司 江西 赣州 341000)

穿心莲为爵床科植物穿心莲AndrographisPaniculata(Burm. f.)Nees的地上干燥部分。具有清热解毒、凉血、消肿功效。用于感冒发热，咽喉肿痛，口舌生疮[1]等疾病的治疗。随着抗生素滥用及不良反应的增加，开发具有良好抗菌效果中药的呼声越来越高。喜炎平注射液抗菌作用显著[2]，其使用的药材为穿心莲，因此，严格控制穿心莲药材的质量，就显得尤为重要。

《中国药典》2010年版一部第251～252页规定，采用HPLC法测定其中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量，来保证穿心莲药材的质量。然而采用普通的HPLC法测定时，存在分析时间长的缺点。本文采用UPLC法[3,4]同时测定穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，该方法大大缩短了分析时间(只需要15min分析一份样品)，且重现性好、易于操作，可为穿心莲药材的质量控制提供新的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-30A/PDA超高效液相色谱系统，CP225D电子天平(赛多利斯仪器有限公司)，KQ-250E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，250W，40KHz)。

1.2 试药 穿心莲内酯对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110797-201108)，脱水穿心莲内酯对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110854-201106)，穿心莲药材(5批，产地分别为广东湛江、广东清远、海南、广西)，甲醇为色谱纯,水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

A.空白溶剂 B.对照品 C.供试品

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Shimadzu Shim-pack XR-ODSⅢ(2.0mm×75mm，1.6μm)；流动相：甲醇-水(48∶52)；流速：0.3 mL/min；检测波长：穿心莲内酯为225nm，脱水穿心莲内酯为254nm；柱温：30℃；进样量：1μL。在此色谱条件下，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的理论塔板数均不低于2000，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。空白溶剂对样品测定无干扰。结果见图1。

2.2 对照品溶液的制备 取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含穿心莲内酯200μg、脱水穿心莲内酯100μg的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取穿心莲药材粉末(过4号筛)0.1028g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，称定重量，浸泡1小时，超声处理30min，放冷，再次称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.4 线性关系考察 分别精密量取对照品溶液0.5mL、1mL、2mL、4mL、6mL、8mL，分别置于10mL量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度的混合标准溶液。分别吸取上述标准溶液各1μL，按照“2.1”项下色谱条件进样分析。以对照品浓度X(μg/mL)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算。回归方程分别为：穿心莲内酯Y=6448.8180X-5748.0330(r=0.9996，n=6)；脱水穿心莲内酯Y=4955.7871X+402.1762(r=0.9998，n=6)。结果表明，穿心莲内酯在10.065～161.04ng(r=0.9996)、脱水穿心莲内酯在5.14～82.24ng(r=0.9998)范围内，具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密吸取供试品溶液1L，按上述色谱条件，重复进样6次，记录色谱峰面积。穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯峰面积的RSD分别为0.37%(n=6)、0.69%(n=6)。结果表明，方法的精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件，于0h、2h、4h、8h、10h、12h各测定一次，记录色谱峰面积。穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯峰面积的RSD分别为0.41%(n=6)、0.83%(n=6)。结果表明，供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.7 重复性试验 取同一穿心莲药材，按“2.3”项下方法重复制备供试品溶液6份，分别进样测定，记录色谱峰面积。穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯峰面积的RSD分别为1.22%(n=6)、1.57%(n=6)。结果表明，方法的重现性良好。

2.8 加样回收率试验

2.8.1 穿心莲内酯加样回收率 取本品适量，研细，取约100mg，精密称定，共6份，置50mL量瓶中，分别精密加入穿心莲内酯对照品溶液(0.2013mg/mL)15mL，其余按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率。结果穿心莲内酯平均回收率为99.25%，RSD=1.03%(n=6)。

2.8.2 脱水穿心莲内酯加样回收率 取本品适量，研细，取约100mg，精密称定，共6份，置10mL量瓶中，分别精密加入脱水穿心莲内酯对照品溶液(0.1011mg/mL)5mL，其余按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率。结果脱水穿心莲内酯平均回收率为98.43%，RSD=1.33%(n=6)，详见表1、表2。

表1 穿心莲内酯回收率测定结果(n=6)

表2 脱水穿心莲内酯回收率测定结果(n=6)

表3 UPLC法测定不同产地穿心莲药材穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯含量 %

2.9 样品含量测定 取穿心莲药材样品，按“2.3”项下方法进行处理，并分别按“2.1”项下色谱条件进行测定，用外标法计算，结果见表3。

3 讨论

本实验根据文献[5]，考察了甲醇-水、乙睛-水等不同流动相系统。结果以甲醇-水(48∶52)为流动相，对两个化合物及相邻杂质峰的分离较好，且基线平稳、分析时间适中。

UPLC法测定穿心莲药材中的穿心莲内酯含量和脱水穿心莲内酯含量，在保证测定结果准确的前提下，具有色谱峰分离度更好，检测灵敏度更高及分析更快速等优势，降低溶剂损耗及分析成本；且测定结果与传统HPLC法测定的结果完全一致，证明该方法能成功替代传统的HPLC法，为穿心莲药材的质量控制提供新的检测方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部[S]北京：中国医药科技出版社，2010：251-252.

[2]马学梅，史美惠．单用喜炎平及合用抗生素对上呼吸道感染患儿热程影响的对照观察[J].中国中西医结合儿科学，2009，1(6):513-514.

[3]陈佳，王钢力，姚令文，等．超高效液相色谱(UPLC)在药物分析领域中的应用[J].药物分析杂志，2008，28(11)：1 976-1 980.

[4]单玲玲，靳光乾，刘善新.UPLC、RRLC及UFLC在中药质量控制中的研究进展[J].中华中医药杂志，2011，26(10)：2 340-2 344.

[5]傅晓燕，黄巧玲．HPLC与UPLC法对比测定两种川芎药材中阿魏酸的含量[J].中药材，2011，34(7)：1 070-1 072.