258例血清中抗-HCV阳性联合HCV-RNA定量检测结果分析

庞丽娜 薛金方

258例血清中抗-HCV阳性联合HCV-RNA定量检测结果分析

庞丽娜 薛金方

目的 探讨丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)和丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)定量联合检测结果对丙型肝炎确诊的临床意义。方法 对258例ELISA法检测的血清抗-HCV阳性丙型肝炎(HC)患者, 同时采用PCR-荧光探针法检测其HCV-RNA含量。结果 258例抗-HCV阳性丙型肝炎患者中HCV-RNA阴性92例, 占35.66%；17例HCV-RNA弱阳性, 占6.59%；HCV-RNA阳性149例,即57.75%的HC患者存在病毒血症。结论 ELISA法联合检测抗-HCV和HCV-RNA有助于丙型肝炎确诊病毒血症以及监控HCV的感染, 并及时进行抗病毒治疗。

丙型肝炎病毒抗体; 丙型肝炎病毒核糖核酸; 丙型肝炎; PCR-荧光探针

丙型病毒性肝炎是一种临床多发疾病, 其一般症状较轻,但病情呈进行性进展, 如果治疗不及时易形成肝硬化甚至是肝癌［1］, 因此准确及时地对丙型肝炎患者进行早期确诊和疗效观察显得十分重要。丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)及丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)是诊断丙型肝炎(HC)的主要病原学指标［2,3］, 前者是间接反映HCV的感染与既往感染,后者是反映患者血清中是否存在病毒血症。本文对258例丙型肝炎病毒抗体阳性的丙型肝炎患者进行丙型肝炎病毒核糖核酸检测, 旨在探讨丙型肝炎确诊病毒血症以及监控HCV的感染, 并及时进行抗病毒治疗。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2013年5月~2014年5月本院门诊及住院的临床确诊丙型肝炎患者258例, 其中男139例, 女119例。年龄19~82岁, 平均年龄45岁。

1.2 仪器与试剂 用于检测HCV-RNA的荧光定量PCR试剂盒购于中山大学达安基因股份有限公司, 仪器为中山大学达安基因股份有限公司ABI Prism 7500 Real Time PCR System,抗-HCV ELISA诊断试剂盒购自丽珠生物工程公司。

1.3 HCV-RNA荧光定量测定

1.3.1 标本处理以及RNA提取 取50 μl经高压灭菌处理的离心管, 加200 μl裂解液, 再分别加入200 μl血清, 漩涡振荡15 s混匀后高速离心10 s, 然后72℃放置10 min；再加入250 μl无水乙醇, 盖紧管盖, 振荡15 s后移至离心柱室温下12 000 rpm离心1 min, 将离心柱装至新的收集管；再加入500 μl的抑制物去除液, 室温下12 000 rpm离心1 min, 将离心柱装至新的收集管；再加入500 μl的去离子液, 室温下12 000 rpm离心1 min, 将离心柱装至新的收集管；再次加入500 μl的去离子液, 室温下12 000 rpm离心1 min, 将离心柱装至新的收集管；将离心柱-收集管于室温下14 000 rpm离心3 min以除去残余的乙醇；将离心柱取出, 放置于新的1.5 ml离心管, 打开离心柱盖子, 72℃放置2 min；在离心柱的膜的正上方小心加入72℃预热的洗脱液35 μl, 盖紧离心柱管盖,室温静置1 min后, 14 000 rpm离心1 min。

1.3.2 PCR扩增 将反应管放入仪器样品槽内, 仪器循环条件设置为50℃ 15 min, 1个循环；95℃ 15 min, 1个循环；94℃ 15 s→55℃ 45 s(收集荧光), 45个循环。每批PCR试验均做阴性、阳性和临界阳性对照。

1.3.3 结果判定 反应结束后自动保存结果, 根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以及Threshold值, 点击Analysis自动获得分析结果, 在Report界面察看结果。若样本的C<1.00E+003, 则该样品的HCV-RNA 浓度<1×103IU/ml； 若样本的1.00E+003≤C≤1.00E+007, 则该样品的HCV-RNA 浓度1×103IU/ml≤C≤1×107IU/ml； 若样本的C>1.00E+007,则该样品的HCV-RNA 浓度>1×107IU/ml；报告相应的病毒载量。

1.4 抗-HCV检测 采用酶联免疫吸附法(ELISA), 抗-HCV ELISA试剂盒的包被抗原为合成多肽抗原和基因工程抗原(包括HCV病毒结构区核心抗原和非结构区抗原), 操作严格遵从试剂盒说明书及免疫学要求进行, 测得的标本的OD≥COV为阳性, 小于阈值为阴性(阈值=0.05+0.08×阳性对照临界平均值)。

2 结果

258例抗-HCV阳性样本中, HCV-RNA阴性92例；HCV-RNA在临界值范围内的有17例；HCV-RNA阳性有149例。具体见表1。

表1 258例ELISA抗-HCV阳性和HCV-RNA 检测结果(n, %)

3 讨论

丙型肝炎, 是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染引起的一种传染病。丙型肝炎呈世界性分布, 我国一般人群HCV的感染率为3.2%［4］。我国丙型肝炎感染率仅次于乙型肝炎。据报道世界范围内27%的肝硬化和25%的原发性肝细胞癌发生于HCV感染者［5］, 由于尚无有效的预防和治疗方法, 丙型肝炎病毒感染者中绝大部分发展成慢性感染,进而发生肝硬化和肝细胞性肝癌［1］。丙型肝炎是一种严重危害人类健康的病毒性肝炎, 由于起病隐匿, 大多数感染者无明显的临床症状和体征, 需依赖实验室检查明确诊断［6-8］。目前, 对HCV复制活跃的患者, 早期开始抗丙肝病毒治疗可望中止或延缓病变发展, 从而改善患者预后［9］。因此, 对HCV感染的早期诊断十分必要和迫切。目前, 对于HCV感染的诊断, 临床上仍以检测抗-HCV为主。

本实验的258例患者中, 92例标本虽然抗-HCV阳性,但HCV-RNA阴性, 表示丙型肝炎病毒在体内停止复制；其中17例HCV-RNA介于实验的临界值, 表示丙型肝炎病毒在体内可能存在复制趋势；149例HCV-RNA阳性, 表示丙型肝炎病毒在体内高度复制, 为抗病毒治疗指征。同时, 在急性丙型肝炎的恢复期, 丙型肝炎病毒复制停止致HCVRNA转阴, 而抗-HCV仍可存在一段时间。对于慢性丙型肝炎, 抗-HCV高滴度表示丙型肝炎病毒复制且有传染性。ELISA法检测抗-HCV和HCV-RNA的联合检测有助于丙型肝炎确诊病毒血症以及监控HCV的感染, 并及时进行抗病毒治疗, 预防疾病严重化。

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Result analysis of serum anti-HCV positive combined with HCV-RNA quantitative detection of 258

cases

PANG Li-na, XUE Jin-fang.Department of Clinical Laboratory, Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen

University, Zhuhai 519000, China

Objective To investigate the clinical significance of hepatitis C virus antibody (anti-HCV) combined with hepatitis C virus ribonucleic acid (HCV-RNA) quantitative detection in the diagnosis of hepatitis C (HC).Methods A total of 258 cases of HC with anti-HCV positive were detected by ELISA method and PCR-fluorescence probe for the HCV-RNA content.Results Among the 258 cases with anti-HCV positive, there were 92 cases of HCV-RNA negative as 35.66%, 17 cases of HCV-RNA weakly positive as 6.59%, and 149 cases of HCV-RNA positive.Thus, there were 57.75% of the HC patients with viremia.Conclusion ELISA method in combined detection of anti-HCV and HCV-RNA helps to diagnose viremia of HC, monitor HCV infection and conduct timely antiviral treatment.

Antibody to hepatitis C virus; Hepatitis C virus ribonucleic acid; Hepatitis C; PCR-fluorescence probe

2014-07-23］

519000 中山大学附属第五医院检验科