GC-MS用于广西三七炮制品中有机氯农药残留测定方法的研究

1.广西中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中医药大学，广西 南宁 530001

GC-MS用于广西三七炮制品中有机氯农药残留测定方法的研究

张赟赟1覃洁萍2

1.广西中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中医药大学，广西 南宁 530001

目的测定广西三七炮制品中有机氯农药的残留量。方法采用气相色谱-质谱联用的选择离子检测(SIM)方法，测定广西三七炮制品中九种有机氯类农药残留量。结果九种有机氯类农药定量测定的线性关系在0.01ng-0.1ng的范围内良好,方法回收率为96.75%-101.84%，RSD%<3.73%。所测定的16个不同品种中有机氯农药残留量均小于2×10-7g/g。结论该方法准确可靠、重复性好，可较好地对三七炮制品中有机氯农药残留量进行控制。

GC-MS；广西三七炮制品；有机氯；农药残留

目前，药材中农药残留的问题引起世界各国学者的重视，特别是由于早期BH、DDT广泛大量地使用，因其不易分解的性质，长期残留在自然界，药材植物体在生长期吸收了土壤或水中的有机氯农药，并在体内细胞中得到富集[1]。研究显示[2]，西洋参、三七部分药材中有机氯农药残留严重超标，说明目前虽已禁用BHC、DDT，但土壤中残留的农药仍对药材有着影响。三七为五加科人参属植物三七Panax notoginseng (Bμrk.)F.H.Chen的干燥根，根据不同炮制方法，又分“生七”及“熟七”两种。传统中医及民间对三七均有“生消熟补”之说，即认为生三七有止血祛瘀、消肿活血、镇痛之效；而熟三七则有补气补血、强身健体之功[3～5]。因此，本实验针对广西三七不同炮制品采用GC-MS分析方法，用选择离子扫描方式进行了有机氯农药的定量分析，以期为提高广西三七药材的质量标准、进一步研究开发三七和开展GAP种植提供科学依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 安捷仑气相-质谱联用仪(5973-6890)；离心机(LD24-0.8，北京医用离心机厂)；超声波台式清洗器(BRANSON B3200S-T)；旋转蒸发器 (RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂)；色谱柱为DB-1弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)。

1.2 试剂及材料 丙酮、二氯甲烷、正己烷均为农残级，硫酸、无水硫酸钠、氯化钠均为分析纯，有机氯对照品(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PCNB、PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDT、PP′-DDT)含量均为0.1mg/ml，中国药品生物制品检定所提供，三七药材产自广西靖西县，并按传统炮制方法进行炮制。详见表1。

表1 广西三七不同炮制品的批号及其炮制方法

2 实验方法和结果

2.1 气相色谱条件 DB-1 弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25um)。程序升温：初始100℃，每分钟10℃升至220℃，每分钟8℃升至250℃，保持8 分钟。进样口温度为230℃，进样量1μl。载气为高纯He气，不分流进样。

2.2 质谱条件 EI 离子源，离子源温度230℃。MS检测器，检测器温度为250℃。

2.3 SIM条件

时间(min)特征碎片离子(m/z)3145，181，25410 18214，237，265，29514 0246，31814 5235，237

2.4 测定方法 在上述色谱及质谱条件下，以选择离子检测方式进行质谱采集，以九种有机氯成份的保留时间和特征质量离子进行定性分析，以峰面积为定量指标，计算样品中九种有机氯的残留量。

2.5 混合对照品储备溶液的制备 精密量取九种有机氯农药对照品溶液(0.1mg/ml)各1ml于250ml容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，制得浓度为400μg/L的混合对照品储备液，备用。

精密量取上述混合对照品储备液1ml至10ml容量瓶中，用正己烷制成浓度为40ug/L 的标准溶液，即得。

2.6 供试品溶液的制备 取三七炮制品于60℃干燥4小时，粉碎成细粉，取约2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g,精密加二氯甲烷30ml，称定重量，超声处理15分钟，用二氯甲烷补足减失的重量，静置(使分层)，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml，于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量正己烷如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用正己烷溶解并转移至10ml具塞刻度的试管中，加正己烷稀释至5ml，小心加入浓硫酸1ml，振摇1分钟，转移上清液至离心管中，离心(3000转/分)10分钟，精密量取上清液2ml，40℃下(或用氮气)将溶液浓缩至适量，精密稀释至 1ml，即得。

2.7 标准曲线的测定 分别精密量取混合对照品储备液2.5、2、1ml至10ml容量瓶中，用正己烷分别制成浓度为100、80、40μg/L的混合对照品溶液；精密量取浓度为40μg/L的混合对照品溶液5ml至10ml容量瓶中，用正己烷制成浓度为20μg/L的混合对照品溶液；精密量取浓度为20μg/L的混合对照品溶液5ml至10ml容量瓶中，用正己烷制成浓度为10μg/L的混合对照品溶液。分别进样1.0μL，以进样量(ng)为横坐标，以相应峰面积为丛坐标，绘制标准工作曲线，并计算回归方程，,得回归方程和相关系数。由表2可以看出，九种有机氯成分在0.01ng-0.1ng的浓度范围内均呈现良好的线性关系。

表2 九种农药的标准曲线

2.8 精密度实验 以浓度为40μg/L的混合对照品溶液进行重复5次测定，按上述色谱条件测定峰面积，结果表明九种有机氯农药标准品溶液的RSD为1.4%-3.7%，说明仪器精密度良好，符合要求。

2.9 稳定性实验 在0、2、6、10、12h时间段对浓度为40μg/L的混合对照品溶液进行测定，结果表明九种有机氯农药对照品溶液在12个小时内的稳定性良好，能满足含量测定的要求。

2.10 加样回收实验 称取样品(批号：E20040324)约2g，平行精密称定6份，分别精密加入浓度为400μg/L的混合对照品溶液1ml，即对照品的加入量为0.40μg，按“供试品溶液的制备”项下操作提取，在上述色谱条件下，精密吸取供试溶液和对照品溶液各1μl进样，测定峰面积，并按下式分别计算九种有机氯农药的回收率。结果见表3。

表3 回收率实验(n=6)

2.11 检测限实验 农药残留分析时，要求分析方法具有一定的灵敏度和分辨率。参照2005年版药典信噪比法,在上述实验条件下，用10μg/L的混合对照品逐级稀释为5μg/L和2.5μg/L的混合对照品,分别进样检测,根据信噪比3:1的比例，计算得各有机氯农药的检出浓度分别为：α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PCNB、PP′-DDD、OP′-DDT、PP′-DDT的浓度为5μg/L，PP′-DDE的浓度为2.5μg/L。检出量：α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PCNB、PP′-DDD、OP′-DDT、PP′-DDT 为0.005ng，PP’-DDE为0.0025ng。

2.12 样品含量测定 准确称取16批采集的样品(粉碎混匀)，按“供试品溶液的制备”项下操作提取，测定，重复两次，用浓度为40μg/L混合对照品溶液做随行标准，计算样品中有机氯农药残留量。

表4 16批样品有机氯农药测定结果(μg/g)

注：“-”为未检测出(低于检测限量)

3 讨论

从本次实验结果可以看出广西范围内的这16批三七炮制品中，有5批的总滴滴涕(PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDT、PP′-DDT)的残留量不符合药典标准的要求，而总六六六(BHC)和五氯硝基苯(PCNB)的残留量都符合药典标准的要求。其余11批次中九种有机氯农药的残留量均符合药典标准的要求(总六六六(BHC)≤千万分之二，总滴滴涕(DDT)≤千万分之二，五氯硝基苯(PCNB)≤千万分之一)。说明了广西三七的种植环境较好，药材的质量较好，但有机氯农药残留对药材的质量仍有一定的影响，应该得到有关部门和相关研究人员的重视。

[1]Aboμ-Arab AAK，Aboμ DMA．Pesticicle resdμes in some Egyptian spicics and medicinal plants as attected by processing[J]．Food Chem 2001，72(4)：439.

[2]张曙明，郭怀忠，陈建民．三七和西洋参中多种有机氯农药残留量分析[J]．中国中药杂志，2000，25(7)：402.

[3]武孔云，陈宝儿，赵伯涛．中药材种养关键技术丛书[M]．南京：江苏科学技术出版社，2001：1.

[4]田华咏，瞿显友，熊鹏辉．中国民族药炮制集成[M]．北京：中医古籍出版社，2000：17.

[5]叶定江．中药炮制学[M]．上海：上海科技出版社，1996：207.

GC-MSfororganochlorinepesticidesresiduesinGuangxinotoginsengprocessedproductsresearchmethod

ZHANG Yunyun1QIN Jieping2

1.Guangxi Institution of chinese Medicine & Pharmaceutical Science，Nanning 530022，China；2．Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530022,China

Objective：Determination of residue of organichlorine pesticides in Guangxi notoginseng processed products.MethodsSelected ion monitoring scan mode (SIM) of GC-MS were adopted.ResultsThis method had good relativity of linearity in 0.01ng-0.1ng, the recoveries of samples were 96.75%-101.84%, RSD%<3.73%. The residue of organichlorine pesticides in Guangxi notoginseng processed products were all less than 2×10-7g/g.ConclusionThe method is accurate and reliable, good repeatability, it can be better for notoginseng organochlorine pesticide residues in processed products.

GC-MS；Guangxi notoginseng processed products；Organochlorine；pesticides

R283

A

1007-8517(2014)05-0019-03

2013.12.09)