银丹心脑通软胶囊对大鼠急性心肌梗死后Bcl-2、Bax水平的影响

2014-09-12 02:03王树东丁丽娟
中国老年学杂志 2014年3期
关键词:银丹心脑卡托普利

王树东 丁丽娟 王 倩 李 特 刘 全

(吉林大学第一医院,吉林 长春 130012)

急性心肌梗死(AMI)后心肌细胞凋亡,左心室心肌细胞凋亡后心室重构使AMI患者左心室功能严重受损,死亡率明显增加〔1〕。Bcl-2/Bax是参与凋亡的重要基因家族之一,Bcl-2/Bax比例失衡即Bax相对过表达在AMI的病变中起重要作用〔2〕。研究证实银丹心脑通软胶囊能够改善脑缺血〔3〕,缓解心肌缺血,增加冠脉血流量,扩张狭窄的冠脉及改善冠脉侧支循环,治疗AMI具有很好的作用〔4,5〕。针对AMI的动物研究显示,银丹心脑通软胶囊可抑制梗死后心肌细胞凋亡〔6〕,但具体机制尚无报道。本实验通过观察银丹心脑通软胶囊对AMI后大鼠心肌Bcl-2、Bax表达的影响探讨其防治AMI后心肌细胞凋亡的机制。

1 材料与方法

1.1主要试剂 银丹心脑通软胶囊(贵州百灵企业集团制药有限公司),卡托普利(上海施贵宝公司),TUNEL试剂盒(德国宝灵曼公司),TRIZOL(invitrogen),M-MLV 逆转录酶、DNA Marker(Takara),dNTP、(oligo)dT(上海生工生物工程技术服务有限公司),其他试剂为国产分析纯。

1.2梗死动物模型建立及分组 90只Wistar大鼠雌雄各半,结扎冠脉前降支建立AMI模型。术后24 h存活大鼠随机分为,模型组、银丹心脑通大剂量组(1.6 g·kg-1·d-1)、银丹心脑通小剂量组(0.8 g·kg-1·d-1)、阳性药对照卡托普利组(5 mg·kg-1·d-1)各12只,假手术组(只穿线不结扎)10只。各给药组均灌胃1次/d,共4 w,模型组与假手术组给予同等剂量生理盐水作为对照。

1.3AMI范围测定 动物心脏称重,将左心室心肌横切4~5 片,然后浸入N-BT 磷酸缓冲液中,置37℃恒温水浴,待染色完全后取出,正常组织染色,缺血组织不染色。照相后图像软件分析,用缺血心肌占左心室心肌面积的百分比计算MIS。

1.4RT-PCR 检测Bcl-2/Bax mRNA表达 取冻存的左心室心肌组织,采用TRIZOL一步法常规提取总RNA。Bcl-2、Bax及 GAPDH PCR引物由 Takara 合成,PCR产物大小分别为427、469、700 bp,GI22010型全自动凝胶成像系统(Tanon,中国)成像并比较Bcl-2、Bax mRNA与GAPDH mRNA 的相对表达量。

1.5脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色 取病变部位的心肌常规脱水固定,石蜡包埋、切片,宝灵曼公司试剂盒(POD) 提供的TUNEL原位检测凋亡细胞的DNA碎片。以单位面积内凋亡细胞数为计算凋亡指数(AI)。

2 结 果

2.1左室梗死范围 模型组大鼠左室梗死范围明显高于假手术组(P<0.05);银丹心脑通软胶囊的大、小剂量组及卡托普利组较模型组明显减小(P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠左室截面直径及梗死范围比较

2.2心肌细胞AI 与假手术组(1.25±0.87)相比,梗死模型组左心室非梗死区的心肌细胞AI(23.33±3.87)显著增加(P<0.05)。银丹心脑通软胶囊大、小剂量组(9.33±1.37;12.58±2.07)和卡托普利组AI(11.17±2.66)明显低于模型组(P<0.05)。

2.3RT-PCR检测Bcl-2/Bax mRNA表达情况 与模型组比较,各给药组Bcl-2 mRNA表达增加(P<0.05),以银丹大剂量组最明显,小剂量与卡托普利组间无明显区别。

大鼠AMI 4 w后,假手术组心肌Bax mRNA仅有少量表达,模型组较假手术组表达明显增多(P<0.01)。与模型组比较,各给药组Bax mRNA表达减少(P<0.05),以银丹大剂量组最明显,小剂量与卡托普利组无明显区别。见图1。

1:假手术组;2:模型组;3:银丹心脑通大剂量组;4:银丹心脑通小剂量组;5:卡托普利组

3 讨 论

银丹心脑通软胶囊主要成分为银杏叶、丹参、灯盏细辛、三七、大蒜、绞股蓝、山楂、冰片,其单味药的基础和临床研究已取得了重大进展,大部分单味药已经精制成静脉注射剂广泛使用,疗效也得到了国内外的认可。银丹心脑通软胶囊兼顾了对冠心病重要危险因子的调理,急缓兼顾,长期应用对控制患者病程进展、预防冠心病事件发生具有重要意义。

Bcl-2和Bax 是一对凋亡调节蛋白,参与细胞凋亡线粒体途径的调节。Bcl-2主要位于线粒体膜、核膜和内质网膜,具有抗细胞凋亡作用。Bax定位于细胞质中,可在凋亡诱导因素作用下发生构型变化,从细胞质移位到线粒体膜,与Bcl-2形成异源二聚体抑制Bcl-2的活性,增加线粒体膜的通透性,使线粒体膜上通透性转换孔开放,导致细胞色素C、(Cyt C)凋亡诱导因子等释放到细胞质中。释放到细胞质中的Cyt C 与胞质中的凋亡蛋白酶激活因子-1和Caspase-9酶原结合形成凋亡酶体,生成有活性的Caspase-9,触发凋亡蛋白酶的级联反应引起细胞凋亡的发生。Bax自身也可形成同源二聚体,同源二聚体Bax/Bax的比例大于异源二聚体Bcl-2/Bax时,会促进心肌细胞的凋亡,反之会抑制细胞凋亡。Li等〔7〕认为由于心脏收缩时坏死心肌向外膨出,反常被动张力的产生使坏死心肌承受更大的壁应力,导致细胞内钙水平明显增加,完整的线粒体膜遭到破坏,线粒体通透性孔开放,导致凋亡〔8〕。本实验提示银丹心脑通软胶囊可能通过抑制Bax的表达,减少心肌细胞凋亡。

4 参考文献

1Rosenkranz S.TGF-β1 and angiotensin networking in cardiac remodeling〔J〕.Cardiol Res,2004;63(3):423-32.

2Misao J,Hayakawa Y,Ohno M,etal.Expression of Bcl-2 protein,an inhibitor of apoptosis,and Bax,an accelerator of apoptosis,in ventricular myocytes of human hearts with myocardial infarction〔J〕.Circulation,1996;94(7):1506-12.

3卫 国,阮波群.银丹心脑通软胶囊治疗急性脑梗死患者80例〔J〕. 中西医结合心脑血管病杂志,2013;11(3):326-7.

4黄 炯.银丹心脑通软胶囊治疗冠心病心绞痛的临床研究〔J〕.中西医结合心脑血管病杂志,2007;6(5):385-7.

5骆 琼,马 丽,叶瑞林,等.银丹心脑通软胶囊治疗慢性稳定型心绞痛临床观察〔J〕.上海中医药杂志,2013;47(1):44-6.

6盖玉生,左鲁宁,乔卫卫,等.银丹心脑通软胶囊抑制大鼠急性心肌梗死后心肌细胞凋亡〔J〕.上海中医药杂志,2013;47(1):55-7.

7Li Y,Takemura G,Kosai K,etal.Critical roles for the Fas/Fas ligand system in postinfarction ventricular remodeling and heart failure〔J〕.Cir Res,2004;95(6):627-36.

8Oskarsson HJ,Coppey L, Weiss RM,etal.Antioxidants attenuate myocyte apoptosis in the remote non-infarcted myocardium following large myocardial infarction〔J〕.Cardiovas Res,2002;45(3):679-87.

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