局灶性脑缺血大鼠VEGF/Notch1信号分子的表达及脑泰方的调节作用

陈 懿 葛金文 廖 君 苏 浩

(湖南中医药大学生理学教研室,湖南 长沙 410208)

近年来，血管新生在缺血性脑梗死中的修复作用已引起广泛关注。近年来许多研究表明，脑缺血时，血管内皮细胞生长因子(VEGF)作为最重要的血管生成因素之一，表达增加，促使血管形成。在血管生成过程中，VEGF诱导Notch信号系统的表达。Notch信号通路是生物体进化中高度保守的信号转导通路，作用具有多样性，参与了正常血管生成、缺血后损伤血管的修复等过程，为脑缺血治疗新的生物学靶点〔1,2〕。益气活血法是临床上治疗缺血性脑卒中常用的中医治法。以往研究已证实益气活血中药脑泰方促进局灶性缺血脑组织VEGF的表达，有治疗性血管新生样作用〔3〕。本实验采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型，观察脑泰方对局灶性脑缺血大鼠缺血半暗带区Notch信号转导通路的影响，探讨其促进脑缺血损伤后治疗性血管新生样作用的分子机制。

1 材料与方法

1.1药物、主要试剂及仪器 脑泰方由黄芪、川芎、地龙等药物组成，经水煎、醇提后制成浸膏粉(由湖南中医药大学药学院制剂教研室提取，每1 g浸膏粉含生药4 g)；Trizol 购自美国INVITROGEN公司， RT-PCR试剂盒购自美国MBI公司。重组人血管内皮抑制素(ED)购自湖南中医药大学第一附属医院。VEGF、Fk-1、Notch1抗体购自Santa Cruz公司。日本Olympus公司BX51光学显微镜及Motic Image Advanced 3.0 图像分析系统，Biomatra公司Tgradient PCR仪。

1.2动物分组与给药 65只雄性清洁级成年SD大鼠，体重250～280 g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号SCXK(沪) 2008-0016。按随机数字表法抽取5只大鼠为假手术组(灌胃生理盐水)，只分离血管，不插入线栓，饲养28 d后取材。……