蛇床子素骨靶向药物对体外培养大鼠成骨细胞护骨素、核因子-κB受体活化因子配基表达的影响

马 勇 郭 杨 袁 涛 鲁俊山 刘尚仑 黄国淳

(南京中医药大学骨伤研究所，江苏 南京 210023)

蛇床子素是中药蛇床子的主要成分，具有刺激成骨细胞增殖，增强骨代谢活动,促进骨修复和骨重建以及抗骨质疏松等作用〔1，2〕。近年研究〔3，4〕发现成骨细胞分泌的RANKL能与破骨细胞及其前体上的核因子-κB受体活化因子配基(RANK)结合，促进成熟的破骨细胞形成。成骨细胞分泌的护骨素(OPG)可以与RANKL结合，竞争抑制RANKL与RANK之间的结合，有效抑制骨转换和破骨过程的活跃〔5〕。本文研究不同浓度的蛇床子素骨靶向药物(NSC-OST)对体外培养的成骨细胞OPG、RANKL表达的影响。

1 材料与方法

1.1实验动物 新生24 h内SD大鼠10只，性别、体重不限，由南京医科大学动物实验中心提供，合格证号：SCXK(苏)2008-0004。

1.2主要仪器与试剂 低糖DMEM培养基、胎牛血清(Hyclone 公司)；NSC-OST(中国药科大学新药研究中心提供)；胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、双抗(Gibco公司)；大鼠OPG酶联免疫试剂盒、大鼠RANKL酶联免疫试剂盒(武汉优尔生科技股份有限公司)；超净工作台(苏州华宇净化设备有限公司)；酶标仪(BioTeK 美国)；倒置式系统相差显微镜(Olympus 日本)。

1.3成骨细胞的分离、培养及纯化 新生24 h的SD乳大鼠双蒸水冲洗数次后夹颈处死，75%酒精中浸泡15 min；迅速取出头盖骨，并快速剔除附着的结缔组织及骨膜，无血清培养液冲洗3次至头盖骨呈白色，用眼科剪将其剪成约1 mm×1 mm大小的骨片；将碎骨片放入预先置有5 ml 0.25%胰蛋白酶的培养皿内，37℃条件下恒温消化20 min，弃去消化液，以清除纤维组织；然后将碎骨片加入预先置有5 ml 0.1%Ⅱ型胶原酶的培养皿内，37℃振荡器振荡，50次/min,60 min，消化2次，将2次收集的上清以1 000 r/min离心10 min，去上清；……