银杏叶提取物预防心肌缺血再灌注损伤的研究

程 阳 唐桥斐 赵丽妮

1.沈阳医学院病理生理学教研室，辽宁沈阳 110034；2.沈阳医学院沈洲医院耳鼻喉科，辽宁沈阳 110034；3.沈阳医学院药理教研室，辽宁沈阳 110034

心肌缺血再灌注损伤是一种分布广泛的临床症状，常见于冠状动脉搭桥术、心肌梗死、再通术及冠状动脉溶栓治疗中，其主要致病机制为机体存在大量的自由基，其中以氧自由基为主[1]。急性心肌梗死是一种冠状动脉急性闭塞疾病，患者的冠状动脉供血不足，导致相应的供血区心肌出现严重的缺血和缺氧状况，研究显示，及早对患者进行有效的抗氧化治疗能够明显的降低心肌损伤程度，并对心功能状态起到一定的改善效果[2]。银杏叶提取物指的是由银杏叶中提取得到的内脂类及黄酮等物质，研究显示，该种物质具有一定的抗氧化作用，能够对脂质过氧化作用起到抑制效果[3]。本次研究于2013年3月—2013年10月期间通过对大鼠心肌缺血再灌注损伤模型进行银杏叶提取物给药治疗，旨在探讨银杏叶提取物在预防心肌缺血再灌注损伤方面的临床疗效，为临床治疗提供可靠的证据。现将结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

50只雄性健康SD大鼠，日龄2～3d，由医学院实验动物中心提供，体重平均为（254±10.16）g。银杏叶提取物采用浙江康恩贝制药股份有限公司提供的药物。

1.2 方法

1.2.1 动物模型 建立大鼠心肌缺血再灌注模型，采用40mg/kg戊巴比妥钠对大鼠进行麻醉，行气管插管人工呼吸，开胸使心脏暴露，将左冠状静脉主干作为标致，于左心耳根部下方约2 cm处进针，使用0号线由心肌表层穿入，肺动脉圆锥旁穿出，20min后，将一直径1.5mm凹槽硅胶管放置于血管和结扎线之间，将结扎线拉近，使硅胶管对冠脉左室支造成压迫形成闭塞，约30min后将结扎线松解，使之再通。对大鼠行心电图监测，若缺血期ST段抬高程度在0.2mV以上，且再灌注后ST段下降幅度在50%以上，则说明结扎和再通取得成功。顺利再灌注后，取后腹主动脉血样2mL，离心备用。

1.2.2 动物分组 将50只SD大鼠随机平均分配为5组：①假手术组：给予常规麻醉剂开胸处理，在对指定部位进行结扎线穿过后，不进行其他操作，于20min平衡后进行观察；②对照组：手术后平衡20min，在缺血时间达到30min时给予10 min再灌注，缺血20 min时给予静脉注射生理盐水；③药物1组、药物2组、药物3组：于对照组缺血再灌注基础上，分别给予银杏叶提取物25 mg/kg、50mg/kg、100mg/kg。

1.2.3 观察指标 采用硫代巴比妥酸法对心肌组织丙二醛水平进行测定，采用Griss法对心肌一氧化氮水平进行测定。

1.3 统计学方法

本次研究采用统计学软件SPSS 13.0对所有数据进行分析处理，采用平均值±标准差的形式表示计量资料，采用t检验对计量资料进行检验，采用χ2检验对计数资料进行检验，P＜0.05表明差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠心肌组织丙二醛及一氧化氮水平对比结果

假手术组大鼠心肌一氧化氮及丙二醛水平明显低于对照组大鼠，差异具有显著性（P＜0.05），表明心肌缺血再灌注损伤会造成相应指标水平明显增高；药物组大鼠心肌组织丙二醛及一氧化氮水平明显低于对照组，差异具有显著性（P＜0.05），其中药物2组下降水平最为明显，增加药物剂量后出现一定下降，但差异无显著性（P＞0.05）。 见表 1。

表1 5组大鼠心肌组织丙二醛及一氧化氮水平对比结果

表1 5组大鼠心肌组织丙二醛及一氧化氮水平对比结果

注：同假手术组比较，*P=0.000，tMDA=11.271，tNO=27.034；同对照组比较，**P=0.000，t MDA-1=9.243，t NO-1=8.951；tMDA-2=9.243，tNO-2=8.951；t MDA-3=9.243，t NO-3=8.951； 同药物 2 组比 较，#P MDA=0.051，P NO=0.056,t MDA=5.461，t NO=7.015。

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3 讨论

银杏时银杏科植物的一种，银杏叶主要为银杏干燥叶，其主要成分为萜内醋类、黄酮类和少量的生物碱及多酚类化学物质，银杏叶提取物中的有效成分主要为银杏内酯和总黄酮类物质，是一种血小板活性因子拮抗剂[4]。临床试验显示，银杏叶提取物具有一定的抗氧化活性和抗氧自由基活性，能够起到降低血液黏度，改善微循环的作用。近代临床研究结果证明，银杏叶提取物能够有效的治疗心脑血管等多种疾病，近年来，银杏叶制剂被广泛应用于冠状动脉粥样硬化心脏病的治疗中[5]。

心肌缺血再灌注损伤指的是心肌在缺血后得到血液再灌注，发生功能代谢障碍，结构受到破坏导致病情加重的现象。临床研究证明，造成心肌缺血再灌注损伤的主要原因为机体自由基水平增高，微血管损伤和细胞内发生钙超载现象等[6]。

当前临床普遍认为，机体氧自由基水平异常升高是引起心肌缺血再灌注损伤的主要原因，相关资料显示，银杏叶提取物能够有效抑制心肌缺血再灌注时氧自由基的产生，增强心肌对机体自由基的清除功能，降低自由基导致的脂质过氧化反应，从而对心肌细胞起到保护作用。心肌组织丙二醛是直至不饱和酸在氧自由基的作用下的一种过氧化反应产物，本次研究中对照组大鼠心肌组织丙二醛水平较假手术组大鼠明显升高，差异具有显著性（P＜0.05），表明缺血再灌注会引起机体心肌丙二醛水平异常增高，表明再灌注会导致氧自由基的水平大幅度增高。本次研究中，通过给予药物组大鼠不同剂量的银杏叶提取物药剂，结果表明，实验组大鼠心肌组织丙二醛水平较对照组大鼠明显降低，差异具有显著性（P＜0.05），有效降低了氧自由基对心肌细胞造成的损伤，对血管内皮细胞的依赖性舒张功能起到一定的改善作用，从而起到心肌缺血再灌注损伤的预防保护效果。

本次研究中，对照组大鼠心肌一氧化氮水平较假手术组大鼠明显升高，差异具有显著性（P＜0.05），表明再灌注会导致机体一氧化氮水平异常升高，同相关资料中的结论基本一致。高水平的一氧化氮会加重心肌损伤，一方面高水平一氧化氮会引起组织cGMP分泌过剩，从而对cGMP依赖性蛋白激酶造成刺激，阻碍细胞钙质外流，造成心肌收缩功能障碍。另一方面，一氧化氮会同再灌注时机体长生的氧自由基结合，造成大量过氧亚硝酸盐阴离子的生成，分解后形成二氧化氮自由基和氢氧化钠自由基，加速了细胞膜的脂质过氧化反应，对心肌收缩功能造成严重损害。本次研究中，通过给予药物组大鼠不同剂量的银杏叶提取物药剂，结果表明，实验组大鼠心肌一氧化氮水平较对照组大鼠明显降低，差异具有显著性（P＜0.05），有效的抑制了一氧化氮同氧气结合生成自由基的过程，从而降低对心肌细胞的损害。

本次研究结果表明，药物1组、药物2组、药物3组大鼠心肌组织丙二醛及一氧化氮水平的降低幅度并未同药剂浓度呈正相关关系，其中以50mg/kg组降低水平最为明显，明显高于25mg/kg组，差异具有显著性（P＜0.05），加大剂量后出现小幅度降低，两组差异无显著性（P＞0.05）。其主要原因在于银杏叶提取物发挥作用主要是通过同心肌细胞膜上的受体进行相互结合，由于受体数量存在限制，因此当达到一定浓度后会发生“饱和现象”，导致加大剂量无法有效的进一步增进疗效，这提示我们在临床用药时，应充分考虑银杏叶提取物的这一性质，针对患者的具体情况给予其适当浓度药物，避免给药过剩。

相关研究表明，银杏叶提取物除具有清除氧自由基作用外，还具有一定的拮抗作用及抑制白细胞活化效果。研究显示，心肌缺血再灌注会引起机体血小板激活因子和白细胞水平异常升高，造成血管的通透性增强，引起心肌收缩力和心输出流量的下降，造成舒张功能障碍，进一步导致心肌损伤。通过给予实验对象一定剂量的银杏叶提取物，机体血小板激活因子及白细胞水平明显降低，其主要作用机制仍需进行深入研究。

综上所述，银杏叶提取物能够有效的降低心肌缺血再灌注对心肌功能造成的损害，能够起到预防心肌缺血再灌注损伤的作用，其中发挥主要效果的为银杏叶提取物的清除氧自由基作用，一方面直接降低心肌组织丙二醛水平，另一方面通过抑制心肌一氧化氮水平来间接抑制氧自由基的产生，但是需要注意的是，银杏叶提取物的心肌保护作用同药物剂量之间并无明显的正相关关系，对于其同心肌细胞的具体作用机制仍需进一步的研究。

[1]朱蓉，冉珂，常业恬，等.银杏叶提取物后处理对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].医学临床研究，2012,29(1):96-98.

[2]李静玲，林小凤，冯鹏，等.银杏叶提取物保护心肌缺血再灌注损伤的研究进展[J].临床合理用药杂志，2013,6(25):180-181.

[3]谢咪雪，蒋琦，陈冬儿，等.银杏叶提取物对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究进展[J].浙江中医药大学学报，2012,36(2):230-232.

[4]郑晓铸，刘凯，夏燕飞，等.银杏叶提取物在体外循环心内直视手术中对心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国现代医生，2010(28):26-27.

[5]秦智刚，艾玲，罗爱林，等.右美托咪定对体外循环下心肌缺血再灌注损伤的保护效应[J].华中科技大学学报：医学版，2013,42(5):551-554.

[6]简文亭，简道林，马会改.迷走神经刺激在心肌缺血再灌注损伤中的研究进展[J].广东医学，2013,34(12):1938-1940.