合成鱼腥草素对溃疡性结肠炎小鼠的保护作用

宋莎莎，杨乐，俞令凯，林陈石，胡娅 （长江大学医学院，湖北 荆州 434023）

溃疡性结肠炎 （ulcerative colitis，UC）是一种弥散的慢性非特异性炎症性肠病，以大肠黏膜与黏膜下炎症病变为主，该病反复发作，迁延不愈，极大地影响患者生活质量［1］。近年来，因其发病率逐年升高而倍受关注。UC病因不明确，尚无特效治疗方法。清热解毒中药鱼腥草具有抗菌、抗炎的作用，本实验探讨鱼腥草主要有效成分鱼腥草素对UC小鼠的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 试剂

合成鱼腥草素 （亚硫酸氢钠癸酰乙醛，鱼腥草素钠，sodium houttuyfonate，HOU，湖南省湘中制药有限公司，批号：110403），葡聚糖硫酸钠 （dextran sulfate sodium，DSS，上海宝曼生物科技有限公司，批号：9011－18－1）。

1.2 仪器

DDL－5M离心机 （赛特湘仪有限公司），RM2235石蜡切片机 （德国Leica），Microphot FXA光学显微镜 （日本Nikon）。

1.3 实验动物与分组

昆明种小鼠，雄性，体质量18～22g。随机分为6组：正常组 （A）、模型组 （B）、合成鱼腥草素低剂量组 （C）、中剂量组 （D）、高剂量组 （E）。除正常组外，其余小鼠自由饮用5%DSS 7d，建立溃疡性结肠炎模型。C、D、E组小鼠分别给予合成鱼腥草素0.2、0.4、0.8g／kg，A、B组给予生理盐水，灌胃给药，1次／d，连续7d。

1.4 病理分析

取结肠组织8cm，行结肠大体形态损伤评分［2］：0分：黏膜无损伤；1分：黏膜充血，血管模糊；2分：黏膜接触性出血；3分：黏膜自发性出血；4分：有明显大小不等的溃疡形成。肉眼观察病变组织后，置于10%的福尔马林液中固定24h，经常规脱水、浸蜡、石蜡包埋，显微镜下观察切片组织的炎症浸润情况，根据文献标准评分［3］，0分：黏膜固有层无中性粒细胞浸润；1分：黏膜固有层有少量中性粒细胞 （＜10个／高倍视野）浸润，累及少量隐窝；2分：黏膜固有层有多量中性粒细胞（10～50个／高倍视野）浸润，累及50%以上隐窝；3分：黏膜固有层有大量中性粒细胞 （＞50个／高倍视野）浸润，伴隐窝脓肿；4分：固有层明显急性炎症伴溃疡形成。

1.5 统计学分析

采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计分析，计量资料以 （）表示，多组间比较采用方差分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 症状

造模完成后，UC小鼠均出现腹泻、粘液脓血便等典型UC活动期症状，治疗7d后，模型组小鼠症状无改善，合成鱼腥草素低剂量组小鼠腹泻，粘液脓血便等症状减轻，中高剂量组小鼠症状逐渐消失。

2.2 小鼠结肠病理组织学改变

与正常组比较，模型组表现为肠道的急性炎症期，伴有黏膜的水肿糜烂，隐窝明显减少，大量炎症细胞浸润。HOU治疗组肠道黏膜被侵蚀及腺上皮消失等炎症反应明显低于模型组，见图1。

图1 小鼠结肠壁粘膜层病理学观察 （HE，×200）

2.3 小鼠结肠组织病理学评分

肉眼观察结肠组织大体形态损伤和镜下观察结肠组织炎症浸润情况，治疗组评分均明显低于模型组，差异有统计学意义 （P＜0.05或P＜0.01）。见表1。

3 讨论

鱼腥草味辛，性寒凉，归肺经，具有清热解毒、消痈排脓等功效，现代药理研究认为鱼腥草有抗菌、抗病毒、抗炎、抗过敏、增强免疫功能的作用，临床用于治疗呼吸、消化、妇科、眼科及肿瘤等多种疾病［4］。鱼腥草素为鱼腥草挥发油中有效成分癸酰乙醛，将其与亚硫酸氢钠成盐，克服了天然鱼腥草素结构不稳定、不溶于水的缺点，得到具有相似生物活性的合成鱼腥草素。

溃疡性结肠炎的病因至今未明，可能与感染、免疫、遗传、环境等多种因素相关。患者病情常常迁延不愈，极易复发，严重影响患者生存质量，且目前尚无有效治疗方法，因此深入研究溃疡性结肠炎的治疗方法非常重要。动物模型的建立是实验研究中非常关键的环节。选择复制动物模型的方案时，应充分考虑病因、发病机理、病理变化及表现症状等尽量与临床接近。目前用于研究的溃疡性结肠炎的实验动物模型大致可分为免疫法、化学法、复合法、基因模型以及中医模型五大种类［5］。本实验选用DSS诱导的小鼠UC模型，该方法建立的UC模型病理生理、组织形态、病程特点等与人类UC近似，是一种较理想的UC动物模型［6］。DSS是由蔗糖合成的一种硫酸多糖，市售DSS的分子量从5000到500000不等，经预实验选择分子量40000的DSS建立UC模型。

溃疡性结肠炎以慢性反复发作的腹痛腹泻或粘液脓血便等为临床特点。本实验中，小鼠自由饮用5%DSS，5～7d后小鼠体质量下降、懒动，并有明显的腹泻、便血等症状，结肠组织呈明显的急性炎症改变。经高、中、低三个剂量合成鱼腥草素灌胃7d治疗后，以上症状均有不同程度的缓解。低剂量组对UC症状有一定的改善作用，但评分与模型组差异无统计学意义 （P＞0.05），中、高剂量组在缓解症状的同时，也显著降低UC小鼠结肠大体形态评分和组织病理学评分 （中剂量组P＜0.05，高剂量组P＜0.01）。实验结果提示，在一定剂量范围内，合成鱼腥草素对UC的治疗效果随剂量增高而增强，具有剂量依赖性。具体量效关系有待于进一步研究。

表1 各组小鼠病变结肠组织肉眼观及镜下观评分

［1］Liu FB，Li XY.Research of the quality of life of patients with ulcerative colitis：current status and future prospects ［J］.World Chinese Journal of Digestology，2011，19 （5）：498.

［2］黄红丽，聂玉强，李瑜元 .溃疡性结肠炎临床严重程度分型与内镜病理分级的关系 ［J］.现代消化与介入诊疗，2008，13（2）：79－81.

［3］钟英强，朱兆华，幸连春 .活动期溃疡性结肠炎活检粘膜的病理组织学特征、分级及其与疾病程度的关系 ［J］.中华消化杂志，2003，23 （7）：414－417.

［4］和殿峰 .鱼腥草的药理研究进展与临床应用 ［J］.中国误诊学杂志，2008，8（22）：5520－5522.

［5］徐阳，唐艳萍 .溃疡性结肠炎中西医动物模型研究进展 ［J］.中国中西医结合外科杂志，2013，19（4）：469－472.

［6］张忠，程富胜，贾宁，等 .小鼠溃疡性结肠炎模型的建立及病理组织学比较 ［J］.中国实验动物学报，2012，20（6）：69－71.