顶空气相色谱法测定盐酸纳美芬的残留溶剂

叶琳

（湖北省医药学院附属医院 药学部，湖北 襄阳 3420095）

顶空气相色谱法测定盐酸纳美芬的残留溶剂

叶琳

（湖北省医药学院附属医院 药学部，湖北 襄阳 3420095）

目的测定盐酸纳美芬原料药中的乙醇、乙醚、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和四氢呋喃的残留量。方法采用顶空气相色谱程序升温法，以DMF 为溶剂，用 DB 624 毛细管柱（30．0 m×0．32 mm，1．8 μm）和 FID 检测器；进样口温度 220℃；检测器温度 250℃；柱温：采用程序升温，35℃保持 8 min，再以30℃的速率升温至180℃保持5 min；顶空进样，顶空平衡温度为80℃，平衡30 min，进样体积1mL。结果原料药中6种溶剂均达到了完全分离，在考察的浓度范围内线性关系良好，最低检测浓度分别为 0．25、0．076、0．15、0．55、0．26、0．30 μg/mL，平均回收率良好。结论所用方法灵敏度、准确度均达到有机残留溶剂的检测要求，可用于盐酸纳美芬原料药中6种残留溶剂的同时检测与分析。

顶空气相色谱法；盐酸纳美芬；有机残留溶剂

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 Agilent 7890 N(安捷伦公司)；乙醇、乙醚、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯为分析纯，四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）为色谱纯。

1.2 色谱条件：色谱柱为Agilent DB 624（30.0 m×0.32 mm，1.8 μm）；柱温：采用程序升温，35℃保持 8 min，再以30℃的速率升温至180℃保持5 min；FID检测器；进样口温度：220℃；检测器温度：250℃；分流比：10∶1；顶空进样，顶空平衡温度为80℃，平衡30 min，定量环温度85℃，转移管温度90℃，进样体积1 mL[5]。

1.3 溶液的制备

1.3.1 对照品溶液的制备 分别精密称取乙醇、乙醚、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和四氢呋喃各适量，用DMF定量稀释制成每1 mL含乙醇5 mg、乙醚5 mg、丙酮5 mg、二氯甲烷0.5 mg、乙酸乙酯5mg和四氢呋喃0.75 mg的溶液，作为对照品贮备液，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。

1.3.2 供试品溶液的制备 精密称取盐酸纳美芬0.2 g，置20 mL顶空瓶中，精密加入DMF 2 mL，密封，溶解，摇匀作为供试品溶液。

2 结果

2.1 系统适用性试验：取1.3.1项下的对照品溶液，按1.2方法试验，色谱图见图1，结果乙醇、乙醚、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和四氢呋喃各峰之间的分离度分别为1.5、5.8、8.8、34.2、3.2，理论板数均大于3.0×104，较直接进样峰形及分离度均更好（见图2）。

图1 对照品（A）和供试品（B）溶液的气相色谱图Fig.1 GC chromatograms of control solution(A) and sample solution (B)

图2 直接进样法对照品（A）和供试品（B）溶液的气相色谱图Fig.2 GC chromatograms of control solution(A) and sample solution (B) by straight inject GC

2.2 线性关系的考察 精密量取1.3.1项下的对照品贮备溶液各 0.4 mL、0.8 mL、1 mL、1.2 mL、1.5 mL，分别置10 mL量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀，分别精密量取2mL，置20 mL顶空瓶中，密封，分别作为线性对照品溶液。按1.2方法试验，以对照品浓度为横坐标，被测溶剂峰面积为纵坐标，进行线性回归（见表1）。

表1 线性范围与方程Tab.1 Regressive equations and linear range

2.3 精密度的考察 精密量取1.3.1项下的对照品溶液2 mL，共5份，分别置20 mL顶空瓶中，密封，按1.2方法依次进样，各被测成分峰面积的RSD分别为：乙醇0.9%、乙醚1.5%、丙酮1.2%，二氯甲烷2.2%，乙酸乙酯1.9%、四氢呋喃1.0%。表明方法精密度良好。

2.4 回收率试验 精密量取1.3.1项下的对照品贮备溶液0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL分别置10 mL量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀，作为回收率对照品溶液①、②、③，精密称取样品约0.2 g，共9份，分别置20 mL顶空瓶中，精密加入回收率对照品溶液①、②、③各2 mL，每种对照品溶液分别加3份，密封，按1.2方法测定，结果见表2。

表2 5种溶剂的回收率测定结果Tab.2 Recoveries of six kinds of solvents

2.5 重复性试验 取批号为20120703的样品，精密称取6份，按1.2项下的方法测定，结果仅检出丙酮，结果分别为0.22%，0.22%，0.23%，0.21%，0.23%，0.23%，RSD为3.66%。

2.6 检出限（S/N=3）与定量限（S/N=10）的测定 精密量取1.3.1项下的对照品贮备液适量，用DMF稀释后按1.2项下的方法测定，测得乙醇的检出限为0.25 μg/mL，定量限为0.76 μg/mL；乙醚的检出限为0.026 μg/mL，定量限为0.077 μg/mL；丙酮的检出限为0.15 μg/mL，定量限为0.50 μg/mL；二氯甲烷的检出限为0.55 μg/mL，定量限为1.64 μg/mL；乙酸乙酯的检出限为0.26 μg/mL，定量限为0.77 μg/mL；四氢呋喃的检出限为0.30 μg/mL，定量限为1.13 μg/mL。各溶剂的灵敏度均能满足盐酸纳美芬有机残留溶剂的测定需要。

2.7 样品的测定 精密称取约0.2 g样品，按1.2项下的方法测定，按外标法以峰面积计算样品的有机残留量（见表3）。

表3 样品中残留溶剂的测定（%）Tab.3 Results of three kinds of solvents in samples(%)

3 讨论

本文建立的方法以DMF为溶剂采用顶空进样法，消除了直接进样法溶剂水对色谱峰峰形的影响，保护了色谱柱，大大改善了各溶剂峰的峰形。由于本品检测的6种溶剂均为易挥发性溶剂，顶空进样各溶剂峰的灵敏度也高于直接进样[6-11]（见图1、图2）。

建立方法的过程中考察了SE-30、DB 624（30.0 m×0.53 mm，3 μm）、DB 624（30.0 m×0.32 mm，1.8 μm）等色谱柱[12-14]对此6种溶剂的分离情况，其中DB 624（30.0 m×0.32 mm，1.8 μm）对6种溶剂的分离情况更好；同时考察了初始柱温 30℃、35℃、40℃，结果表明

30℃与35℃基本一致，较40℃更好，考虑到30℃作为初始温度可能较室温更低，不好控制，所以采用35℃作为初始温度。

本方法根据ICH对有机溶剂残留量的测定方法的指导原则[15]统一了盐酸纳美芬现行标准中所涉及的所有6种残留溶剂的测定方法，并按中国药典2015年版对6种溶剂制定了限度[16]，为盐酸纳美芬残留溶剂方法的统一提供了依据。

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[3] 中华人民共和国国家药典委员会．国家药品标准[S]．YBH 14372008．

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[16] 中华人民共和国国家药典委员会．中国药典[S]．二部．北京：化学工业出版，2015：附录 61-65．

Determination of the residual orgamic solvents in Nalmefene Hydrochloride by headspace GC

YE Lin
(Department of pharmacy, The Affiliated Hospital of Hubei Medical College, Xiangyang 3420095, China)

ObjectiveTo develop a headspace GC method for simultaneously determining the residual organic solvents such as Ethanol, Diethyl ether, Acetone, Dichloromethane, Ethyl acetate, and Tetrahydrofuran in Nalmefene Hydrochloride.MethodsSamples dissolved in DMF and six organic residual organic solvents were separated on a DB 624 capillary column (30.0 m×0.32 mm,1.8 μm) with a FID detector. The inlet temperature was 220℃ and the FID detector temperature was 250℃. The column temperature rose by program: the initial temperature was 35℃, maintained for 8 min, raise to 180℃ with a rate of 30℃/min, maintained for 5 min. The heated temperature of the headspace oven was 80℃, the heated time lasted 30 min, and the injection volume was 1.0 mL.ResultsSix residual orgamic solvents, including Ethanol, Diethyl ether, Acetone, Dichloromethane,Ethyl acetate, and Tetrahydrofuran in Nalmefene Hydrochloride were completely separated. It was appeared to present a good linearity within the experimental concentration. The limit of detection for Ethanol, Diethyl ether, Acetone, ichloromethane, Ethyl acetate, and Tetrahydrofuran were 0.25,0.076,0.15,0.55,0.26 and 0.30 μg/mL.The method has a good average recovery rate.ConclusionThe method is proved to be accurate and sensitive after validation. It is suitable to determine the residual orgamic solvents in Nalmefene Hydrochloride .

gas chromatography; Nalmefene Hydrochloride; residual orgamic solvents

R 917

A

1005-1678(2014)02-0075-03

盐酸纳美芬为为纯粹的阿片受体拮抗药，本身无内在活性，但能竞争性拮抗μ、κ、δ阿片受体，其中与μ受体的亲和力最强。临床用作完全或部分逆转阿片类物质效应，包括

由天然或人工合成的阿片类物质引起的呼吸抑制。在临床上，盐酸纳美芬除具有传统阿片受体拮抗剂的用途，抗昏迷、休克、解除中枢性呼吸抑制、治疗急性乙醇、吗啡、CO、农药以及不明原因的中毒治疗、麻醉催醒、吸毒患者的戒断治疗及戒断后预防复吸、心力衰竭，在中枢神经损伤急性期应用可降低颅内压、减少脑水肿、阻止神经细胞死亡、保护中枢神经细胞的作用，甚至还用于减肥、胃肠功能紊乱、病理性赌博和皮肤瘙痒症、男性性功能障碍的治疗等[1]。

盐酸纳美芬现行标准有YBH 11182008、YBH 14372008和YBH 11222008。生产厂家在生产过程中分别采用了乙醇、乙醚、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和四氢呋喃共6种毒性较大的有机溶剂，各标准方法均采用直接进样法测定其残留溶剂，有些标准甚至未对残留溶剂进行控制，其中YBH 14372008更采用水作溶剂[2-4]。采用直接进样法各溶剂峰峰形较差，以水作溶剂更影响色谱柱的寿命。本文建立了采用顶空进样的方法测定盐酸纳美芬6种残留溶剂的方法，方法更科学，结果更准确、可靠。

叶琳，女，本科，副主任药师，研究方向：药物分析以及药物质量控制，E-mail：yelin 9876543@163.com。