重组人p53腺病毒联合表阿霉素抑制胃癌细胞的作用

孔研 曲范杰

在我国, 胃癌属于常见的恶性肿瘤, 病发率高居第三。胃癌的治疗措施有限, 大多的胃癌治疗药物具有很高的耐药性, 导致其疗效有限［1］。当今, 分子生物技术的发展, 基因治疗已成为可能, 对于胃癌的治疗具有广阔的前景［2］。现将其与化疗药物表阿霉素联合使用, 探讨两药合用时对胃癌细胞的抑制作用, 具体情况如下。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 ①重组人p53腺病毒(深圳赛百诺基因技术有限公司, 国药准字S20040004)；②表阿霉素(浙江海正药业股份有限公司, 国药准字H20030674)；③RPMI-1640细胞组织培养液(Hyclone, USA)；④标准新生的牛血清；⑤PI试剂盒；⑥购自Santa公司的兔抗p53抗体；⑦DPA、SP试剂盒(福州迈新生物技术有限公司提供)。上述药物与试剂均在有效期内。

1.2 细胞培养 胃癌细胞(MGC-803)由本实验室储存, 胃癌细胞在含有10%的新生标准牛血清的RPMI-1640细胞组织培养液中进行培养, 恒温37℃、5%CO2、在适度饱和的环境中进行培养［3］。

1.3 细胞增殖曲线 胃癌细胞以45000/孔的量接种在24孔的细胞培养板上, 相应得分为实验组与对照组, 实验组对应的孔径内分别注入109vp的rAd-p53、10-6g EPI, 两药合用(109vp+10-6g EPI), 并加入培养液1 ml/孔, 每组设有3个复孔；对照组的孔径中仅加入1ml的细胞培养液, 进行常规的细胞培养。次日, 使用胰酶/EDTA进行消化并收集, 技术每组计数需重复3次, 坚持6 d, 根据数据绘制相应的细胞增殖曲线［4］。

1.4 流式细胞分析 胃癌细胞以500000/孔的量接种在6孔的细胞培养板上, 相应得分为实验组与对照组, 实验组对应的孔径内分别注入5×109vp的rAd-p53、10-6g EPI, 两药合用(5×109vp+10-6g EPI), 并加入培养液3 ml/孔；对照组的孔径中仅加入3 ml的细胞培养液。……