miR-503通过靶定IGF-1R基因抑制胃癌生长与侵袭

胡俊华，喻琴，杨艳果，王琦，卢光新

（1.湖北医药学院附属人民医院消化内科，十堰 442000；2.湖北医药学院附属人民医院儿科，十堰 442000）

胃癌（gastric carcinoma）是源自胃黏膜上皮的恶性肿瘤，是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率占消化道全部恶性肿瘤的首位。我国每年约有17万人死于胃癌，几乎为恶性肿瘤致死的全部患者的1/4。研究［1－4］表明，微小 RNA（miRNA）与胃癌的发生发展密切相关，多种miRNA在非恶性组织和胃癌组织中差异性表达。研究［5］发现，miR-503在胃癌细胞中可以抑制胃癌细胞的生长及细胞间质转化，但是关于miR-503在胃癌中作用机制的研究尚不明确。本实验利用实时定量PCR（Real-time PCR）证实了miR-503在胃癌中呈现低表达，可以抑制胃癌细胞生长，并且探索了miR-503对胃癌细胞生长和侵袭能力的影响机制及其发挥该作用的靶基因胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R），为胃癌的治疗提供了新的靶点。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂

1.1.1 病理样本 10例胃癌及癌旁组织样本，由天津肿瘤医院病理科提供，并已通过病理学验证。

1.1.2 细胞 人胃癌细胞系 MGC-803和SGC－7901，购于上海中科院细胞库。

1.1.3 主要试剂 胎牛血清购自Hyclone公司；DMEM高糖培养基、1640细胞培养基及转染用OPTI-MEM 均购自 Gibico公司；转染试剂LipofectamineTM2000购自Invitrogen公司（美国）；miR-503模拟物、模拟物对照、IGF-1R 干扰RNA、干扰RNA对照均购买于上海吉玛技术制药有限公司；反转录酶及Real-time PCR试剂盒购自Takara公司；体外细胞侵袭的Transwell小室购自Millipore公司；兔抗人IGF-1R、GAPDH（内参）多克隆抗体以及羊抗兔二抗购自Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 人胃癌细胞系MGC-803使用90%DMEM高糖培养基＋10%胎牛血清培养；SGC-7901使用1640培养基＋10%胎牛血清培养。……